Практикум по биохимии, изд. 2 (Северин С. Е. и др.)

Практикум по биохимии, изд. 2

Автор(ы):Северин С. Е. и др.
06.10.2007
Год изд.:1989
Издание:2
Описание: В пособии рассматриваются современные методы аналитической биохимии, основы препаративной энзимологии, методы изучения кинетики и механизмов регуляции ферментативных процессов, приемы иммобилизации ферментов и иммуноферментного анализа, а также методы, используемые при изучении метаболизма митохондрий и бионергетики.
Оглавление:
Практикум по биохимии — обложка книги. Обложка книги.
Предисловие [3]
Список сокращений [4]
РАЗДЕЛ ПЕРВЫЙ Углеводы и липиды (Г. А. Соловьёва, Н. Н. Зайцева, В. И. Телепнева)
  I. Методы концентрационного анализа [5]
    1. Фотометрические (спектрофотометрический и колориметрический) методы [5]
    2. Манометрический метод Варбурга [10]
  II. Количественное определение углеводов и продуктов их обмена [18]
    1. Определение глюкозы энзиматическим методом [18]
      Определение глюкозы в крови [19]
      Определение активности глюкозо-оксидазы (манометрический метод) [20]
    2. Определение глюкозы феррицианидным методом [21]
    3. Определение глюкозы и гликогена с антроном [23]
    4. Определение гликогена после ферментативного гидролиза глюкоамилазой из Aspergillus niger [25]
    5. Выделение гликогена из биологического материала [25]
    6. Методы определения молочной кислоты [26]
      Колориметрический метод с n-оксидифенилом [26]
      Энзиматический метод [27]
    7. Методы определения пировиноградной кислоты [29]
      Манометрический метод с использованием пируватдекарбоксилазы [29]
      Энзиматический метод с использованием лактатдегидрогеназы [31]
      Спектрофотометрическое определение с семикарбазидом [32]
    8. Определение неорганического фосфата [33]
      Метод Фиске—Суббароу [34]
      Метод Херса [35]
      Метод Самнера [35]
      Метод Ратбуна и Ветлах [36]
      Метод Бенцини [37]
    9. Определение лабильных фосфорных соединений [37]
    10. Определение фосфотриоз (глицеральдегид-3-фосфата и диоксиацетонфосфата) [38]
    11. Определение глюкозо-1-фосфата (легкогидролизуемых в кислотах фосфорных соединений) [39]
    12. Определение глюкозо-6-фосфата [40]
      Определение по фосфату [40]
      Энзиматический метод [40]
    13. Определение фруктозо-1,6-дифосфата [41]
      Определение по фруктозе [41]
      Анализ чистоты бариевой соли фруктозо-1,6-дифосфата [43]
      Перевод бариевой соли фруктозо-1,6-дифосфата в натриевую [43]
    14. Определение фруктозо-6-фосфата [44]
    15. Определение общего фосфора [44]
    16. Количественное определение фосфорных эфиров углеводов после разделения методом бумажной хроматографии [45]
  III. Ферментативные превращения углеводов [48]
    1. Анаэробный распад углеводов [49]
      Анаэробный распад гликогена (гликогенолиз) [50]
      Анаэробный распад глюкозы (гликолиз) [51]
      Гликолиз в присутствии йодацетата [52]
      Гликолиз в присутствии фторида [53]
      Влияние фторида на превращение фруктозо-1,6-дифосфата в молочную кислоту [54]
      Влияние кофакторов на превращение фруктозо-1,6-дифосфата в присутствии фторида [55]
      Влияние кислорода на процесс гликолиза (эффект Пастера) [56]
    2. Превращения промежуточных продуктов гликолиза [58
      Превращение глюкозо-1-фосфата в гликоген [58]
      Влияние адреналина на уровень сахара крови и активность фосфорилазы мышечной ткани [59]
      Превращение глюкозо-1-фосфата в глюкозо-6-фосфат [60]
      Превращение глюкозо-6-фосфата во фруктозо-6-фосфат [61]
      Превращение фруктозо-6-фосфата в глюкозо-6-фосфат [63]
      Образование фосфотриоз из фруктозо-1,6-дифосфата [63]
    3. Фосфатазное расщепление гексозофосфатов [65]
      Превращение глюкозо-6-фосфата в глюкозу [65]
      Превращение фрук-тозо-1,6-дифосфата во фруктозо-6-фосфат [66]
  IV. Методы выделения, фракционирования и количественного определения липидов [67]
    1. Основные приемы работы с липидами [67]
    2. Определение общего содержания липидов в тканях [70]
    3. Определение липидов мозговой ткани с помощью хроматографии в тонком слое [71]
    4. Выделение триацилглицеринов из печени крысы [75]
    5. Выделение фосфолипидов из яичных желтков [76]
РАЗДЕЛ ВТОРОЙ Природные азотсодержащие соединения (М. И. Сафронова, Н. Б. Гусев, Л. Н. Матвеева, М. М. Фейгина)
        А. Белки [80]
  I. Методы количественного определения белка в биологическом материале [80]
    1. Колориметрические методы [80]
      Биуретовый метод [80]
      Метод Лоури [81]
      Определение белка в присутствии неионных детергентов [82]
      Определение с кумасси синим [83]
    2. Спектрофотометрический метод [83]
    3. Определение содержания белка в препаратах, иммобилизованных на сефарозе [84]
      Спектрофотометрическое определение в присутствии полиэтиленгликоля [84]
      Колориметрическое определение по модифицированному методу Брэдфорд [85]
    4. Определение по азоту [85]
      Изотермическая перегонка аммиака (метод Конвея) [85]
      Микрометод определения азота в биологическом материале (по Енике) [87]
  II. Методы фракционирования белков [88]
    1. Электрофоретическое разделение белков [88]
      Электрофорез на бумаге [89]
      Электрофорез в агаровом геле [92]
      Электрофорез в полиакриламидном геле [94]
      Аналитическое изоэлетрическое фокусирование белков в полиакриламидном геле [98]
    2. Разделение белков методом хроматографии [101]
      Метод гель-хроматографии [106]
      Метод ионообменной хроматографии [108]
      Метод адсорбционной хроматография [114]
  III. Определение молекулярной массы белков [116]
    1. Метод гель-хроматографии на колонках [116]
    2. Гель-хроматография в тонком слое сефадекса [117]
    3. Электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия [119]
      Метод Вебера и Осборн [119]
      Метод Лэммли [121]
  IV. Определение аминокислотного состава белков и пептидов [122]
    1. Гидролиз белков и пептидов [123]
      Кислотный гидролиз [124]
      Щелочной гидролиз [125]
    2. Разделение и идентификация аминокислот [125]
      Метод хроматографии на бумаге [126]
      Метод ионообменной хроматографии [132]
      Метод средневольтного горизонтального электрофореза на бумаге [137]
  V. Гидролиз белков до пептидов [139]
    1. Ферментативный гидролиз [140]
      Расщепление трипсином [140]
      Расщепление химотрипсином [140]
    2. Химический гидролиз [141
      Расщепление по остаткам метионина [141]
      Расщепление по остаткам цистеина [142]
      Расщепление по остаткам триптофана [144]
  VI. Определение функциональных групп в белках и пептидах [145]
    1. Свободные NН(?)-группы белков и пептидов [145]
      Определение N-концевых аминокислот методом динитрофенилирования [145]
      Определение количества свободных NН(?)-групп в пептидах (аминокислотах) методом частичного динитрофенилирования [147]
      Определение N-концевых аминокислот дансильным методом [148]
    2. С-концевые аминокислоты в белках и пептидах [154]
      Определение С-концевых аминокислот с помощью карбоксипептидаз [155]
      Определение С-концевых аминокислот с помощью гидразинолиза [156]
    3. Сульфгидрильные группы белков и пептидов [157]
      Определение числа сульфгидрильных групп методом титрования n-хлор-меркурибензоатом [158]
      Определение числа сульфгидрильных групп с помощью реактива Эллмана [160]
        Б. Нуклеиновые кислоты
  I. Количественное определение нуклеиновых кислот в биологическом материале [161]
    1. Спектрофотометрическое определение суммарного содержания нуклеиновых кислот [162]
    2. Определение нуклеиновых кислот по фосфору [163]
    3. Определение нуклеиновых кислот по пентозе [163]
      Определение содержания ДНК с дифениламином по Дише [163]
      Определение содержания РНК с орцином по Мейбаум [164]
    4. Раздельное определение РНК и ДНК в тканях (по методу Шмидта—Таннгаузера) [164]
  II. Выделение нуклеиновых кислот [166]
    1. Выделение и очистка ДНК по методу Мармура [166]
    2. Выделение препаратов ДНК и РНК фенольным методом (по Кирби— Георгиеву) [167]
    3. Выделение препарата РНК из печени крысы фенольным методом (по Шерреру) [169]
    4. Выделение РНК из рибосом [170]
  III. Методы фракционирования нуклеиновых кислот [171]
    1. Адсорбционная хроматография нуклеиновых кислот на гидроксилапатите [171]
    2. Ультрацентрифугирование рибонуклеиновых кислот в градиенте плотности сахарозы [172]
    3. Электрофорез рибонуклеиновых кислот в полиакриламидном геле [173]
      Разделение суммарной фракции РНК [173]
      Разделение рибосомальной РНК [174]
  IV. Ферментативное расщепление нуклеиновых кислот [175]
    1. Получение рестриктов ДНК фага Я и разделение их с помощью электрофореза в геле агарозы [175]
    2. Расщепление РНК панкреатической рибонуклеазой и разделение продуктов хроматографическими методами [176]
      Гель-хроматография на колонке с сефадексом [176]
      Ионообменная хроматография на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой [177]
  V. Определение нуклеотидного состава нуклеиновых кислот [177]
    1. Нуклеотидный состав ДНК [177]
      Разделение оснований ДНК методом хроматографии на бумаге [178]
      Разделение оснований ДНК методом тонкослойной хроматографии [179]
    2. Нуклеотидный состав РНК [180]
      Разделение рибомононуклеотидов методом электрофореза на бумаге [180]
      Разделение рибомононуклеотидов методом хроматографии на бумаге [181]
      Разделение рибомононуклеотидов методом тонкослойной хроматографии [182]
        В. Низкомолекулярные азотсодержащие соединения [183]
  I. Определение аденинсодержащих нуклеотидов в животных тканях [183]
    1. Разделение адениловых нуклеотидов [183]
      Метод электрофореза на бумаге [183]
      Метод хроматографии на бумаге [184]
      Метод тонкослойной хроматографии [184]
      Метод ионообменной хроматографии на колонке [186]
    2. Количественное определение компонентов адениловой системы [187]
  II. Определение содержания никотинамидных коферментов в животных тканях [187]
    1. Определение НАД+ и НАДФ+ [188]
    2. Определение НАДН и НАДФН [189]
  III. Определение креатина и фосфокреатина [188]
    1. Определение креатина с диацетилом [189]
    2. Определение фосфокреатина по фосфору [190]
  IV. Определение гистидинсодержащих дипептидов [191]
    1. Определение карнозина в безбелковом экстракте по диазореакции [192]
    2. Определение дипептидов с помощью хроматографии на бумаге [192]
    3. Определение дипептидов с помощью тонкослойной хроматографии на пластинках «Силуфол» [193]
  V. Определение свободных аминокислот [194]
    1. Определение свободных аминокислот в мышечной ткани [195]
    2. Определение свободных аминокислот в сыворотке крови [195]
РАЗДЕЛ ТРЕТИЙ Энзимология (П. Л. Вульфсон, Н. К. Наградова, Г. А. Кочетов, В. И. Муронец)
  I. Общие принципы работы с ферментами [196]
    1. Экстракция, методы очистки и определение чистоты ферментных препаратов [198]
    2. Хранение ферментов [205]
    3. Выражение активности ферментов [206]
  II. Исследование каталитических свойств ферментов [206]
    1. Определение кинетических параметров [206]
    2. Методы определения ферментативной активности [208]
    3. Определение активности в системе сопряженных реакций [208]
    4. Определение зависимости скорости реакции от концентрации субстрата [210]
    5. Определение зависимости скорости реакции от рН [211]
    6. Определение зависимости скорости реакции от температуры [211]
    7. Исследование влияния ингибиторов [212]
    8. Исследование стабильности ферментов [214]
    9. Исследование аллостерических ферментов [214]
  III. Выделение, очистка и определение активности ферментов [216]
    1. Гексокиназа [216]
    2. Гликогенфосфорилаза [219]
    3. Киназа фосфорилазы [222]
    4. Получение фосфорилазы (?) [225]
    5. Фосфоглюкомутаза [226]
    6. Глюкозофосфатизомераза [232]
    7. Фосфофруктокиназа [237]
    8. Альдолаза [245]
    9. Триозофосфатизомераза [249]
    10. Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа [253]
    11. Получение триозофосфатов [258]
    12. 3-Фосфоглицераткиназа [260]
    13. Глицерол-3-фосфатдегидрогеназа [266]
    14. Пируваткиназа [269]
    15. Лактатдегидрогеназа [273]
    16. Алкогольдегидрогеназа [276]
    17. Транскетолаза [279]
      Транскетолаза из пекарских дрожжей [279]
      Транскетолаза из печени свиньи [285]
    18. Получение фосфопентоз [287]
    19. Получение ферментного препарата, содержащего триозофосфатизомеразу и глицерол-3-фосфатдегидрогеназу, из скелетных мышц кролика [290]
    20. Креатинкиназа [291]
  IV. Иммобилизация ферментов на BrCN-сефарозе [296]
    1. Получение препарата BrCN-активированной сефарозы [296]
    2. Иммобилизация ферментов [297]
    3. Определение активности иммобилизованных ферментов [298]
    4. Получение иммобилизованных субъединиц олигомерных ферментов [300]
    5. Иммобилизация фосфоглицераткиназы и ее использование для синтеза 1,3-дифосфоглицерата [303]
    6. Получение иммуносорбентов и их использование для очистки антител [304]
РАЗДЕЛ ЧЕТВЕРТЫЙ Иммуноферментный анализ (Т. В. Буларгина)
  I. Получение антител [307]
    1. Получение поликлональных антител [307]
    2. Получение моноклональных антител [309]
  II. Получение конъюгатов антител с ферментными метками [317]
    1. Получение конъюгатов антител с пероксидазой [317]
    2. Получение конъюгатов антител с щелочной фосфатазой [318]
    3. Определение рабочего титра конъюгатов иммуноглобулинов с ферментной меткой [318]
  III. Изучение свойств антител [320]
    1. Определение специфичности гибридом [320]
    2. Определение титров антител в асцитных жидкостях [321]
    3. Определение классов и подклассов иммуноглобулинов [321]
    4. Определение эпитопной специфичности антител [322]
    5. Определение аффинности антител [323]
  IV. Изучение антигенной структуры ферментов [325]
    1. Очистка антигенов на иммуносорбенте с моноклональными антителами [325]
    2. Сравнение антигенных структур изоферментов и ферментов из разных источников [325]
РАЗДЕЛ ПЯТЫЙ Регуляция активности ферментов (Н. Ю. Гончарова, М. В. Иванов, Е. В. Петушкова, А. М. Рубцов)
  I. Регуляция активности ферментов клеточными метаболитами [330]
    1. Изучение свойств цАМФ-зависимых протеинкиназ [330]
    2. Регуляция активности пируваткиназы скелетных мышц [333]
    3. Изучение изоферментного состава лактатдегидрогеназы сердечной и скелетной мышц [336]
    4. Изучение информационных изменений лактатдегидрогеназы при связывании кофермента и субстрата [340]
    5. Исследование внутриклеточной локализации изозимов аспартатами-нотрансферазы печени [351]
    6. Аллостерическая регуляция активности фруктозо-1,б-дифосфатазы [354]
  II. Регуляция активности мембраносвязанных ферментов [358]
    1. Исследование регуляторных свойств Са—АТФазы саркоплазматического ретикулума [358]
    2. Изучение процессов активации аденилатциклазы [368]
    3. Модуляция активности глюкозо-6-фосфатазы под действием детергентов [370]
    4. Изменение свойств гексокиназы при связывании с мембранами [373]
  III. Роль белок-белковых взаимодействий в реализации каталитической активности ферментов [377]
    1. Регуляция активности фосфодиэстеразы циклических нуклеотидов [377]
    2. Иммобилизация глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы [383]
    3. Иммобилизация лактатдегидрогеназы [386]
    4. Иммобилизация альдолазы и получение комплекса альдолазы с глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой [389]
  IV. Подходы к выявлению функционально значимых участков и групп молекулы фермента [391]
    1. Получение протеолитических фрагментов миозина, обладающих АТФазной активностью [391]
    2. Роль сульфгидрильных групп и гидрофобных взаимодействий в АТФазной активности миозина [398]
РАЗДЕЛ ШЕСТОЙ Метаболизм митохондрий. Биоэнергетика (А. Д. Виноградов, Ю. Н. Лейкин, Е. А. Васильева, В. Г. Гривенникова, А. Б. Котляр, Т. Ю. Липская)
  I. Получение интактных митохондрий из различных тканей [403]
    1. Выделение митохондрий скелетных мышц [404]
    2. Выделение митохондрий сердечной мышцы [405]
    3. Выделение митохондрий печени крысы [406]
  II. Получение субмитохондриальных фрагментов и фракционирование митохондрий [407]
    1. Получение субмитохондриальных фрагментов (препарат Кейлина—Хартри) [407]
    2. Получение субмитохондриальных частиц из сердца быка [408]
    3. Фракционирование интактных митохондрий печени крысы [410]
  III. Получение отдельных компонентов дыхательной цепи и реконструкция полиферментных систем [414]
    1. Отделение к реконструкция компонентов дыхательной цепи (сукцинат-дегидрогеназа) [415]
    2. Отделение к реконструкция компонентов дыхательной цепи (цитохром с) [418]
    3. Отделение и реконструкция компонентов дыхательной цепи (на примере коэнзима Q) [421]
    4. Получение сукцинат: убихинон-оксидоредуктазы (комплекс II) [423]
    5. Получение сукцинат: цитохром с-оксидоредуктазы (комплекс II+III) [426]
    6. Получение убихинон: цитохром с-оксидоредуктазы (комплекс III) [429]
    7. Получение цитохромоксидазы (комплекс IV) [432]
  IV. Функционирование дыхательной цепи [435]
    1. Дыхательная цепь. Ингибиторы переноса электронов [435]
    2. Окисление НАДН в митохондриях различных тканей [436]
    3. Функционирование первого пункта сопряжения в интактных митохондриях [438]
    4. Ингибирование НАДН-оксидазной активности дыхательной цепи ротеноном [441]
  V. Проницаемость мембран и транслоказные реакции в митохондриях [442]
    1. Перенос ионов калия через митохондриальную мембрану [442]
    2. Изучение проницаемости митохондриальной мембраны для растворов электролитов [444]
    3. Пассивная проницаемость внутренней мембраны митохондрий для анионов [447]
    4. Активный транспорт ионов Са(?) в митохондриях печени [449]
    5. Полярографическое изучение активного транспорта кальция в митохондриях печени [450]
    6. Специфичность системы транспорта кальция в митохондриях [453]
    7. Накопление ионов Mg(?) митохондриями сердечной мышцы [455]
    8. Изучение кинетики транспорта неорганического фосфата в митохондриях [458]
    9. Роль транслоказных реакций в кинетике синтеза и гидролиза АТФ в митохондриях [459]
    10. Роль транслоказных реакций в функционировании ЦТК [460]
  VI. Реакции трансформации энергии в митохондриях [462]
    1. Полярографическое определение степени сопряженности препарата митохондрий [462]
    2. Измерение степени сопряженности и скорости окислительного фосфорилирования в митохондриях. Зависимость от концентрации белка и роль ионов Са(?) [465]
    3. Окислительное фосфорилирование с различными субстратами [467]
    4. Влияние разобщителей на процессы трансформации энергии в митохондриях [469]
    5. Измерение АТФазной активности митохондрий [471]
    6. Изучение АТФазной реакции, катализируемой АТФ-синтетазным комплексом митохондрий [474]
    7. Влияние внутримитохондриального Са(?) на реакции синтеза и гидролиза АТФ в митохондриях [476]
    8. Креатинкиназная активность митохондрий сердечной мышцы [479]
  VII. Некоторые методы, применяемые при изучении метаболизма митохондрий [480]
    1. Полярографический метод определения поглощения кислорода [480]
    2. Определение белка митохондрий и субмитохондриальных частиц с биуретовым реактивом [483]
    3. Определение концентрации растворов магния и кальция методом комплексонометрического титрования [484]
Приложение [487]
Формат: djvu
Размер:5372428 байт
Язык:RUS
Рейтинг: 607 Рейтинг
Открыть: Ссылка (RU)