Аффинная хроматография. Методы

Автор(ы):Дин П., Мидл Ф.
06.10.2007
Год изд.:1988
Описание: Книга зарубежных авторов (США, Великобритания и др.) посвящена одному из наиболее эффективных биохимических методов исследования - аффинной хроматографии. Книга содержит не только краткое теоретическое обсуждение рассматриваемой проблемы, но главным образом конкретные и подробные методики проведения того или иного эксперимента, что делает ее незаменимым практическим пособием в области аффинной хроматографии.
Оглавление:
Аффинная хроматография. Методы — обложка книги.
От переводчика [5]
Предисловие [7]
Авторы [9]
Принятые сокращения [10]
Основы техники безопасности [10]
Глава 1. Получение матриц и их применение [11]
  1. Введение [11]
  2. Агароза [11]
    2.1. Структура агарозы [12]
    2.2. Получение поперечно-сшитой агарозы [14]
    2.3. Получение агарозных шариков [15]
    2.4. Методика получения агарозных шариков [17]
    2.5. Свойства суперозы 6В, агарозного геля для высокоэффективной аффинной хроматографии [18]
    2.6. Магнитная агароза (магногель) [19]
  3. Целлюлоза [19]
    3.1. Сферическая целлюлоза. Введение [19]
    3.2. Получение сферической целлюлозы [19]
    3.3. Свойства сферической целлюлозы [20]
  4. Декстран [22]
  5. Полиакриламид [22]
  6. Трисакрил [24]
    6.1. Получение трисакрилового полимера в форме шариков [27]
    6.2. Введение аминогрупп на шарики трисакрила (трисакрил-NН(?)) [27]
  7. Гидроксиалкилметакрилатные гели [28]
  8. Полиакриламид-агарозные гели [29]
  9. Иммобилизация ферментов на трубках из поливинилацетатэтилена [29]
    9.1. Введение [29]
    9.2. Методы получения реакционноспособных трубок из поливинилацетатэтилена [30]
    9.3. Иммобилизация ферментов на поверхности активированных трубок [32]
  10. Эупергит С [33]
    10.1. Реакции эупергита с белком [34]
    10.2. Образование производных эупергита С с низкомолекулярными соединениями [34]
  11. Гранулированный пористый оксид алюминия [37]
    11.1. Введение [37]
    11.2. Получение иммобилизованных смесей (общая методика) [38]
    11.3. Результаты и обсуждение [38]
  12. Стекло с контролируемым размером пор [41]
  13. Диолсвязанный силикагель [42]
    13.1. Введение [42]
    13.2. Материалы [43]
    13.3. Методы [43]
    13.4. Обсуждение [44]
    13.5. Определение содержания диола в диолсвязанном силикагеле методом периодатного окисления [44]
      Литература [46]
Глава 2. Методы активации [48]
  1. Бромоциан [48]
    1.1. Присоединение вставок к матрицам [48]
    1.2. Метод активации с титрованием [49]
    1.3. Стадия присоединения [50]
    1.4. Другой метод активации [51]
  2. Методы, основанные на активации оксиранами [52]
    2.1. Введение [52]
    2.2. Оксирановая активация агарозы [53]
  3. Гидроксисукциниламидосукцинил-агароза [55]
    3.1. Аминирование эпоксиактивированной агарозы до амино-агарозы [55]
    3.2. Получение N-гидроксисукцинимидного эфира агарозы [55]
    3.3. Активация сукциниламино-агарозы N-гидроксисукцинимидом [56]
    3.4. Присоединение гемагглютинина из Lens culinans к активированной агарозе [56]
  4. Триазиновая активация агарозы [56]
    4.1. Замечания [57]
    4.2. Присоединение этилендиамина или алифатического диамина к триазинактивированной агарозе [57]
    4.3. Триазиновая активация фильтровальной бумаги [58]
    4.4. Присоединение м-аминофенилборной кислоты к триазинактивированной бумаге [58]
  5. Активация агарозы 2,4,6-трифторо-5-хлоропиримидином [58]
    5.1. Методические указания [58]
    5.2. Присоединение гексаметилендиамина к ФХП-агарозе [61]
    5.3. Присоединение анилина к ФХП-агарозе [61]
    5.4. Присоединение имидазола к ФХП-агарозе [62]
    5.5. Присоединение этантиола к ФХП-агарозе [62]
    5.6. Присоединение глицилглицина/n-аминобензамидина к ФХП-агарозе (биоспецифический адсорбент для трипсина) [62]
  6. Карбонилдиимидазольная активация [63]
    6.1. Активация сефарозы CL 6В карбонилдиимидазолом [63]
    6.2. Присоединение лигандов к активированным матрицам [63]
    6.3. Рекомендованный метод для применения коммерчески доступной КДИ-активированной агарозы [64]
  7. Активация с использованием метода смешанных ангидридов [65]
    7.1. Получение 17(?)-эстрадиол-6-(О-карбоксиметил)оксима—БСА [65]
    7.2. Получение изохлорокарбонатактивированных матриц [65]
  8. Периодатное окисление [66]
    8.1. Получение аминогексил-агарозы [66]
    8.2. Периодатная активация целлюлозы [67]
    8.3. Получение иммуноадсорбентов с очень низким неспецифическим связыванием с использованием окисленной периодатом поперечно-сшитой сефарозы [67]
    8.4. Присоединение антител и антигенов к окисленной с помощью периодата сефарозе CL 6В [68]
  9. Полиизоцианатна*я активация гидроксилсодержащих полимеров [71]
    9.1. Некоторые сведения об используемых матрицах [71]
    9.2. Методика активации на примере сферической целлюлозы [71]
    9.3. Методика присоединения [72]
    9.4. Сравнение с другими методами присоединения [73]
  10. Иммобилизация с использованием органических сульфонилхлоридов [74]
    10.1. Введение [74]
    10.2. Методика [76]
  11. Введение функциональных групп в агарозные шарики путем карбоксиметилирования и образования аминоэтиламидного производного [77]
    11.1. Введение [77]
    11.2. Методика [79]
    11.3. Заключительные замечания [82]
      Литература [83]
Глава 3. Поперечно-сшивающие агенты для присоединения вставок к матрицам [84]
  1. Введение [84]
  2. Методы присоединения нуклеофильных лигандов к карбоксилат-содержащим матрицам с использованием карбодиимидов [84]
  3. Получение гидроксисукцинимид-агарозы [85]
    3.1. Присоединение лигандов к агарозе, содержащей гидроксисукцинимидные сложноэфирные группы [86]
  4. Получение сукцинилированной аминоалкил-агарозы [86]
    4.1. Получение N-алкиламил-агарозы [86]
    4.2. Сукцинилирование [87]
  5. Ацилазидная активация [87]
    5.1. Получение гидразидо-агарозы [87]
    5.2. Получение ацилазидо-агарозы [88]
  6. Иммобилизация белков на полиакриламидных шариках с использованием глутарового альдегида [88]
    6.1. Получение и активация шариков [88]
    6.2. Активация шариков [89]
  7. Методики присоединения с использованием дивинилсульфона [90]
    7.1. Активация агарозных шариков [90]
    7.2. Присоединение к дивинилсульфон-агарозе [90]
  8. Методики присоединения, основанные на использовании диазониевых групп [90]
    8.1. Получение NAD-агарозы [90]
    8.2. Получение диазоний-агарозы [91]
  9. Присоединение лигандов через реакционноспособные азокрасители [92]
    9.1. Получение регенерированной целлюлозы [92]
    9.2. Определение содержания целлюлозы в суспензии регенерированной целлюлозы [92]
    9.3. Присоединение реакционноспособного азокрасителя к регенерированной целлюлозе и восстановление до аминоарил-целлюлозы [93]
    9.4. Диазотирование аминоарилцеллюлозы и присоединение белков [93]
    9.5. Присоединение гонадотропина хориона человека к сефарозе CL 4В с использованием активации реакционноспособным азокрасителем [95]
  10. Получение тиол-агароз [97]
    10.1. Активированная глутатион-агароза [97]
    10.2. Получение тиопропил-агарозы [98]
      Литература [99]
Глава 4. Методики проведения эксперимента [100]
  1. Определение концентрации лиганда на сорбенте [100]
  2. Дифференциальный анализ [100]
    1.2. Спектрофотометрия гелей [100]
    1.3. Солюбилизация гелей [100]
    1.4. Кислотный или ферментативный гидролиз [101]
    1.5. Элементный анализ [101]
    1.6. Радиоактивные методы [101]
    1.7. Определение аминов с использованием 2,4,6-тринитробензолсульфоновой кислоты (ТНБС) [102]
    1.8. Определение алкиламиногрупп, присоединенных к CNBr-активированной агарозе [102]
  2. Отщепление лиганда [102]
  3. Влияние концентрации лигандов [104]
  4. Влияние размеров колонки [104]
  5. Влияние скорости потока и времени инкубации [105]
  6. Влияние рН и температуры [109]
    6.1. Влияние рН [109]
    6.2. Влияние температуры [110]
  7. Ионная сила [112]
  8. Методы десорбции [113]
    8.1. Конкурентное элюирование лигандом [113]
    8.2. Элюирование коферментами [114]
    8.3. Изменение ионной силы [116]
    8.4. Изменение растворителя [116]
    8.5. Элюирование путем изменения температуры [117]
    8.6. Изменение буфера и/или рН [118]
    8.7. Хаотропные реагенты [119]
    8.8. Электрофоретическая десорбция [119]
  9. Использование цилиндрических перегородок в крупномасштабных аффинных колонках [122]
    9.1. Введение [122]
    9.2. Результаты и обсуждение [124]
  10. Изготовление и использование мини-колонок для высокоэффективной аффинной хроматографии [124]
    10.1. Изготовление колонок [125]
    10.2. Упаковка колонки [125]
      Литература [128]
Глава 5. Лиганды для иммобилизации [130]
  1. Нуклеиновые кислоты [130]
    1.1. Связывание ДНК с КМ-целлюлозой [130]
    1.2. Иммобилизация нуклеиновых кислот на бисоксиранактивированных полисахаридах [131]
    1.3. Иммобилизация ДНК на целлюлозе с использованием водорастворимого карбодиимида как конденсирующего агента [132]
    1.4. Получение олиго(dТ)-целлюлозы [132]
    1.5. Получение поли (U)-целлюлозы [133]
    1.6. Получение поли(11), присоединенной к пористым стеклянным фильтрам [134]
    1.7. Получение поли(11), присоединенной к CNBr-активированнои агарозе [134]
    1.8. Получение ДНК, иммобилизованной на агароза-акриламидной матрице [134]
  2. Белки [135]
    2.1. Иммобилизация альбумина и IgG на агарозе [135]
    2.2. Иммобилизация белков на эупергите С (оксиран-акриловые шарики). Общая методика [135]
    2.3. (?)-Макроглобулин, связанный с носителем [139]
    2.4. Иммобилизация уреазы на найлоне [139]
    2.5. Иммобилизация пепсина [140]
    2.6. Иммобилизация аспартатаминотрансферазы [141]
    2.7. Иммобилизация триптофаназы [141]
    2.8. Присоединение IgC кролика к гидразидным шарикам [142]
    2.9. Использование колонок с силикагелем, содержащим иммобилизованный бычий сывороточный альбумин, для оптического расщепления методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) [142]
  3. Иммобилизация лектинов [149]
    3.1. Иммобилизация лектинов проростков пшеницы на сефарозе [149]
    3.2. Иммобилизация гепарина [151]
  4. Очистка (?)-глутамилтрансферазы иммуноаффинной хроматографией [151]
    4.1. Введение [151]
    4.2. Некоторые вспомогательные методики [152]
    4.3. Получение и выделение антител [153]
    4.4. Получение иммуноадсорбентов. Общая методика [154]
    4.5. Очистка GGT (легкая форма) из тканей животных [155]
    4.6. Примеры [157]
    4.7. Заключительные замечания [162]
  5. Аффинная хроматография на гепарин-сефарозе и казеин-сефарозе для очистки и разделения ДНК-зависимых РНК-полимераз и протеинкиназ [162]
    5.1. Введение [162]
    5.2. Основные экспериментальные методики [163]
    5.3. Оборудование и биоспецифические адсорбенты для аффинной хроматографии [165]
    5.4. Методика хроматографии на гепарин-сефарозе [165]
    5.5. Методика хроматографии на казеин-сефарозе [168]
    5.6. Характеристика РНК-полимеразных фракций, выделенных с колонки с гепарин-сефарозой [169]
    5.7. Концентрирование и хранение ферментных препаратов [170]
    5.8. Регенерация и хранение аффинных адсорбентов [170]
    5.9. Замечания по экспериментальным методикам [170]
  6. Присоединение м-аминофенилборной кислоты к триазинактивированным носителям [171]
    6.1. Хроматография с использованием иммобилизованной АФБК [173]
  7. Применение иммобилизованных красителей [173]
    7.1. Получение матриц с иммобилизованными красителями [173]
    7.2. Хроматография ДНК на бисакриламидах с иммобилизованными красителями. Общая методика [175]
  8. Иммобилизация нуклеотидов [177]
    8.1. Получение N(?)-(6-аминогексил)-5'-АМР [177]
    8.2. Присоединение N(?)-(6-аминогексил)-5'-АМР к сефарозе 4В [179]
  9. Гидрофобная хроматография [179]
    9.1. Синтез сефарозы (?) (формула) CNBr-методом [180]
    9.2. Синтез аминоалкил-сефарозы-(?) (формула) CNBr-методом [181]
    9.3. Свойства и характеристика адсорбентов [181]
    9.4. Выбор колонки (аффинного сорбента) для очистки конкретной системы [181]
    9.5. Оптимизация разделения двух ферментов [182]
    9.6. Выбор гомологического ряда аффинных сорбентов [183]
    9.7. Методы элюирования [183]
    9.8. Примеры применения гидрофобной хроматографии [184]
  10. Применение иммобилизованных ингибиторов в хроматографии пепсинов [187]
    10.1. Приготовление аффинных сорбентов [187]
    10.2. Хроматография пепсина свиньи на колонках (?)-аминокапроил-L-фенилаланил-D-фенилаланилметил-сепароном с различными концентрациями иммобилизованного ингибитора [188]
  11. Выделение белков, связывающих витамин BIS, с использованием аффинной хроматографии [189]
    11.1. Присоединение производных витамина B(?) к 3,3'-диаминодипропиламинзамещенной сефарозе [189]
      Литература [189]
Глава 6. Количественная характеристика взаимодействий с использованием аффинной хроматографии [192]
  1. Введение [192]
  2. Основные теоретические выражения [193]
    2.1. Системы с одновалентным распределяющимся веществом [193]
    2.2. Системы с мультивалентиым растворенным веществом [194]
  3. Экспериментальные аспекты количественной аффинной хроматографии [197]
    3.1. Колоночная хроматография [197]
    3.2. Эксперименты по распределительному равновесию [200]
    3.3. Проблема определения концентрации свободного лиганда [202]
  4. Анализ результатов для моновалентных растворенных веществ [203]
    4.1. Полный анализ конкурентной аффинной системы [203]
    4.2. Анализ лигандзадерживаемых аффинных систем [204]
    4.3. Приближенный анализ результатов аффинной хроматографии [205]
  5. Анализ результатов для мультивалентных растворенных веществ [206]
    5.1. Суммарная концентрация доступных положений [207]
    5.2. Экстраполяция результатов к неопределенной концентрации растворенного вещества [207]
    5.3. Одновременное определение R(?) и m(?) графическими методами [209]
    5.4. Определение m(?) и R(?) методом минимизации стандартных ошибок [211]
    5.5. Системы с лигандзадерживаемым элюированием растворенного вещества [212]
    5.6. Определение второй константы равновесия [213]
  6. Значение констант равновесия для взаимодействий с матрицей [213]
  7. Заключительные замечания [214]
      Литература [216]
Глава 7. Количественная аффинная хроматография с зональным элюированием и анализ молекулярных взаимодействий [217]
  1. Введение [217]
  2. Зональное элюирование в аналитической аффинной хроматографии [218]
  3. Использование кривых элюирования для расчета констант равновесия [222]
    3.1. Моновалентные системы [222]
    3.2. Бивалентные системы [224]
  4. Получение и характеристика аффинных матриц [225]
    4.1. Иммобилизация лиганда [225]
    4.2. Определение емкости [226]
    4.3. Примеры получения аффинных матриц [227]
  5. Приготовление образцов для количественной аффинной хроматографии. Контроль элюирования [230]
    5.1. Приготовление образцов и введение радиоизотопной метки [230]
    5.2. Контроль элюирования [231]
  6. Примеры результатов аналитической аффинной хроматографии с зональным элюированием [233]
    6.1. Связывание нуклеазы стафилококков с иммобилизованными нуклеотидами  [234]
    6.2. Бивалентный иммуноглобулин А (ТЕРС 15 IgA мономер) — фосфорилхолин [235]
    6.3. Бычий нейрофизин II —пептиды [237]
    6.4. Нейрофизин—нейрофизин [240]
  7. Заключение [240]
      Литература [241]
Глава 8. Разделение клеток аффинной хроматографией. Иммобилизация лигандов на твердых носителях через расщепляемые связи ртуть—сера [243]
  1. Введение [243]
  2. Современное состояние аффинной хроматографии клеток [243]
  3. Аффинная хроматография клеток с лигандами, иммобилизованными через расщепляемые связи ртуть—сера [248]
    3.1. Описание метода [249]
    3.2. Методики [252]
    3.3. Применения [253]
  4. Заключительные замечания [257]
  5. Благодарности [259]
      Литература [259]
Дополнительная литература [262]
Предметный указатель [263]
Формат: djvu
Размер:7834846 байт
Язык:RUS
Рейтинг: 370 Рейтинг
Открыть: