Вирусология. Методы

Автор(ы):Мейхи Б.
06.10.2007
Год изд.:1988
Описание: В книге авторов из Великобритании, Швейцарии и США приведены конкретные методики работы с большинством вирусов человека и животных. Каждый раздел включает подробное описание способов культивирования вирусов определенной группы, их концентрирования, очистки, определения инфекционного титра и других методов.
Оглавление:
Вирусология. Методы — обложка книги.
От переводчика [5]
Предисловие к английскому изданию [7]
Список авторов [9]
Список сокращений [10]
Глава 1. Очистка, биофизическая и биохимическая характеристика вирусов (преимущественно вирусов растений). Р. Халл [12]
  1. Введение [12]
  2. Очистка вирусов растений [12]
    2.1. Растения - хозяева [12]
    2.2. Экстракция вирусов из растений [13]
    2.3. Осветление экстрактов [14]
    2.4. Концентрирование вирусов [15]
    2.5. Дальнейшая очистка [16]
    2.6. Что такое «чистота»? [19]
    2.7. Хранение вирусных препаратов [19]
    2.8. Конкретные методики очистки [20]
  3. Биофизическая характеристика [22]
    3.1. Необходимость биофизической характеристики [22]
    3.2. Ультрафиолетовые спектры [22]
    3.3. Седиментационные свойства [24]
    3.4. Коэффициенты диффузии [26]
    3.5. Определение молекулярной массы [26]
    3.6. Плавучая плотность [27]
    3.7. Электронная микроскопия [28]
    3.8. Обнаружение вирусов методом дот - блот гибридизации [29]
  4. Биохимический анализ [33]
    4.1. Выделение нуклеиновых кислот [33]
    4.2. Определение типа нуклеиновой кислоты [36]
    4.3. Определение содержания нуклеиновой кислоты [37]
    4.4. Гель-электрофорез нуклеиновых кислот [39]
    4.5. Гель-электрофорез белков [41]
    4.6. Гель-электрофорез вирусных частиц [42]
      Литература [42]
Глава 2. Культивирование, идентификация и очистка пикорнавирусов. П. Майонор [44]
  1. Введение [44]
  2. Меры безопасности [45]
  3. Культивирование пикорнавирусов [46]
    3.1. Выбор клеток [46]
    3.2. Условия культивирования [48]
    3.3. Сбор вирусов [49]
    3.4. Наращивание полиовируса типа 3 для заражения клеток [50]
    3.5. Получение меченного [(?)S]-метионином полиовируса типа 3 на монослойных клеточных культурах в химических пробирках [50]
    3.6. Получение вируса в суспензионной культуре клеток HeLa [51]
  4. Идентификация вирусов [52]
    4.1. Методы определения инфекционности [52]
    4.2. Методы определения антигенных свойств [54]
    4.3. Другие методы идентификации пикорнавирусов [57]
  5. Очистка вирусов [57]
    5.1. Общие замечания [57]
    5.2. Концентрирование пикорнавирусов [58]
    5.3. Очистка пикорнавирусов [59]
    5.4. Фракционирование градиентов [62]
      Литература [65]
Глава 3. Культивирование, титрование и очистка тогавирусов. Е. Гулд и Дж. Клегг [66]
  1. Введение [66]
  2. Культивирование тогавирусов [67]
    2.1. Заражение новорожденных мышат [67]
    2.2. Выделение и наращивание тогавирусов в культуре клеток комаров [73]
    2.3. Наращивание вирусов в культуре клеток млекопитающих [77]
    2.4. Выращивание вирусов на комарах и их личинках [81]
  3. Титрование тогавирусов [83]
    3.1. Титрование путем интрацеребрального заражения новорожденных мышат [83]
    3.2. Титрование в культуре клеток [85]
    3.3. Титрование методом гемагглютинации [91]
  4. Очистка тогавирусов [95]
    4.1. Культивирование тогавирусов [95]
    4.2. Концентрирование вирусов [97]
    4.3. Очистка вирусов градиентным центрифугированием [100]
  5. Общие выводы [105]
  6. Благодарности [106]
Приложение [107]
  1. Среды для культур тканей [107]
  2. Среды для поддержания культур клеток [108]
  3. Растворитель для природного материала [108]
  4. Приготовление суспензии природного материала [109]
  5. Обработка сывороток, используемых в РТГА [109]
  6. Реактивы и буферные растворы [109]
      Литература [111]
Глава 4. Культивирование, очистка и титрование рабдовирусов. В. Вуннер [112]
  1. Введение [112]
  2. Наращивание рабдовирусов в культурах клеток [113]
    2.1. Кривая нарастания титра в одиночном цикле размножения [113]
    2.2. Титрование вирусов [116]
  3. Выделение и очистка вирусов [122]
    3.1. Рабдовирусы животных [122]
    3.2. Рабдовирусы растений [126]
      Литература [129]
Глава 5. Пневмовирусы. К. Прингл [131]
  1. Уникальные особенности пневмовирусов [131]
    1.1. Общее введение [131]
    1.2. Номенклатура [133]
    1.3. Выделение вируса [133]
    1.4. Хранение вируса [134]
  2. Основные методы [134]
    2.1. Культивирование респираторно-синцитиального вируса [134]
    2.2. Методы определения инфекционности [136]
    2.3. Гемагглютинация [138]
    2.4. Гемадсорбция [139]
    2.5. Иммунофлуоресцентные методы [139]
    2.6. Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) [140]
  3. Аналитические методы [142]
    3.1. Радиоактивное мечение, радиоиммуноанализ и радиоиммунопреципитация [142]
    3.2. Метод выявления дефектных интерферирующих частиц [145]
    3.3. Электронная микроскопия [145]
    3.4. Концентрирование вируса [150]
    3.5. Очистка и радиоактивное мечение РСВ [150]
    3.6. Радиоактивное мечение вирионной РНК [151]
    3.7. Анализ вирусных РНК и белков методом электрофореза в полиакриламидном геле [152]
    3.8. Очистка матричной РНК для трансляции [154]
    3.9. Молекулярное клонирование и олигонуклеотидное секвенирование [155]
    3.10. Очистка вирусных белков [155]
  4. Специальные биологические методы [157]
    4.1. Получение моноклинальных антител [157]
    4.2. Выделение температурно-чувствительных мутантов [158]
    4.3. Получение персистентно инфицированных клеточных культур [159]
      Литература [159]
Глава 6. Выращивание, очистка и титрование вирусов гриппа. Т. Баррет и С. Инглис [161]
  1. Общее введение [161]
  2. Системы для размножения вирусов гриппа [162]
    2.1. Куриные эмбрионы [162]
    2.2. Наращивание вирусов в культурах клеток [166]
    2.3. Органные культуры [168]
  3. Методы титрования вирусов [169]
    3.1. Титрование вирусов гриппа в реакции гемагглютинации [169]
    3.2. Титрование путем определения инфекционности - для куриных эмбрионов [174]
    3.3. Титрование вирусов с использованием фрагментов эмбрионов [176]
    3.4. Титрование вирусов гриппа методом бляшек [178]
    3.5. Электронная микроскопия вирусов гриппа [181]
  4. Очистка вирусов гриппа [181]
    4.1. Введение [181]
    4.2. Концентрирование вируса [183]
    4.3. Методы очистки вирусов гриппа [184]
  5. Определение активности вирионных ферментов [188]
    5.1. Вирнонная транскриптаза [188]
    5.2. Нейраминидаза [189]
    5.3. Слияние вирусной и клеточной мембран [192]
  6. Хранение вирусных препаратов [193]
  7. Радиоактивное мечение вируса [194]
    7.1. Введение метки в РНК [194]
    7.2. Введение метки в белки [195]
  8. Среды и буферные растворы [197]
    8.1. Среды для культуры клеток ФЭК [197]
    8.2. Буферные растворы [198]
  9. Благодарности [199]
      Литература [199]
Глава 7. Вирусы, содержащие двунитевую РНК. М. Мак-Кри [201]
  1. Классификация вирусов, содержащих двунитевую РНК [201]
  2. Выделение вирусов и культуры клеток [202]
    2.1. Поддержание культур клеток для наращивания реовирусов [202]
    2.2. Получение вирусного инокулята [203]
    2.3. Наращивание вирусов в больших масштабах [203]
  3. Очистка вирусов [204]
    3.1. Сбор зараженных клеток и первая экстракция вируса [204]
    3.2. Очистка вируса центрифугированием в градиенте [206]
    3.3. Определение выхода и хранение очищенного вируса [207]
  4. Культивирование и очистка ротавирусов [207]
    4.1. Адаптация к размножению в культуре клеток [209]
  5. Наращивание и очистка ротавирусов для биохимических исследований [211]
  6. Биохимические методы [212]
    6.1. Транскрипция вирусных мРНК в бесклеточной системе [212]
    6.2. Трансляция вирусных мРНК в бесклеточной системе [215]
    6.3. Трансляция вирусных геномных днРНК для определения их кодирующих функций [216]
    6.4. Молекулярное клонирование генома днРНК-содержащих вирусов [218]
      Приложение [221]
      Литература [222]
Глава 8. Обезьяний вирус (SV40) и вирус полиомы: культивирование, титрование, трансформация и очистка вирусных компонентов. Г. Тюрлер и П. Берд [223]
  1. Введение [223]
  2. Техника безопасности при работе с вирусом полиомы и SV40 [224]
  3. Культуры клеток, среды и буферы [224]
    3.1. Культуры клеток [224]
    3.2. Клетки-хозяева для SV40 и вируса полиомы [225]
    3.3. Среды и сыворотки [226]
    3.4. Буферы и растворы [226]
  4. Получение заготовок вируса [226]
  5. Очистка SV40 и вируса полиомы [231]
    5.1. Равновесное центрифугирование в градиенте плотности CsCl [232]
    5.2. Центрифугирование в градиенте плотности сахарозы [234]
    5.3. Некоторые особенности методов работы с вирусом полиомы [235]
  6. Определение концентрации вируса [235]
    6.1. Титрование вируса методом бляшек [236]
    6.2. Идентификация вируса полиомы в реакции гемагглютинации [237]
    6.3. Анализ вирусной ДНК электрофорезом в агарозном мини-геле [240]
    6.4. Определение количества зараженных клеток с помощью иммунофлуоресцентного окрашивания культур на внутриядерный опухолевый антиген [241]
  7. Опухолевая трансформация клеток [244]
    7.1. Инфицирование непермиссивных клеток [245]
    7.2. Получение колоний на пластике в жидкой среде [245]
    7.3. Получение колоний в полужидком агаре [20] [246]
  8. Выделение вирусной ДНК и вирусных мини-хромосом из инфицированных клеток [248]
    8.1. Экстракция вирусной ДНК [248]
    8.2. Выделение мини-хромосом SV40 [250]
  9. Благодарности [252]
      Литература [252]
Глава 9. Культивирование, очистка и титрование аденовирусов. Б. Прешиос и В. Рассел [254]
  1. Введение [254]
  2. Клеточные системы для культивирования аденовирусов [254]
    2.1. Аденовирусы человека, легко адаптируемые к культуре клеток [256]
    2.2. Аденовирусы человека, трудно адаптируемые к культуре клеток [261]
    2.3. Вирусы других видов [262]
  3. Очистка [263]
    3.1. Экстракция инфицированных клеток [263]
    3.2. Очистка вируса из экстрактов инфицированных клеток [263]
    3.3. Свойства очищенного вируса [265]
  4. Титрование вируса [265]
    4.1. Титрование вируса методом бляшек [265]
    4.2. Титрование вируса по ЦПД определением конечной точки [267]
    4.3. Метод флуоресцирующих фокусов [268]
    4.4. Общие замечания [269]
      Литература [269]
Глава 10. Культивирование, идентификация и очистка герпесвирусов. Р. Киллингтон и К. Пауэлл [270]
  1. Введение [270]
  2. Вирусы простого герпеса типов 1 и 2 [270]
    2.1. Получение заготовок вируса [271]
    2.2. Электронная микроскопия (подсчет частиц) [275]
    2.3. Определение инфекционного титра [276]
    2.4. Приготовление экстрактов клеток, инфицированных вирусом [278]
    2.5. Получение очищенного вируса [279]
    2.6. Другие (?)-герпесвирусы [283]
  3. Цитомегаловирус человека [287]
    3.1. Получение заготовок вируса [287]
    3.2. Цикл размножения [288]
    3.3. Идентификация вируса [289]
    3.4. Метод черных бляшек [290]
    3.5. Культивирование и очистка CMV [290]
    3.6. Типы частиц CMV [292]
  4. Герпесвирус саймири (HVS) [295]
    4.1. Получение заготовок вируса [295]
    4.2. Титрование вируса [299]
    4.3. Цикл размножения [299]
    4.4. Получение очищенного вируса [301]
  5. Благодарности [302]
      Литература [302]
Глава 11. Методы клинической вирусологии П. Морган-Капнер и Дж. Паттисон [304]
  1. Введение [304]
  2. Электронная микроскопия [304]
    2.1. Прямое электронно-микроскопическое исследование фекалий [305]
    2.2. Иммуноэлектронная микроскопия [307]
  3. Идентификация вирусных антигенов [307]
    3.1. Идентификация респираторно-синцитиального вируса в носоглоточных выделениях методом иммунофлуоресценции [309]
  4. Культуры клеток [310]
  5. Иммунологические методы [312]
    5.1. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) [314]
    5.2. Реакция связывания комплемента (РСК) [317]
    5.3. Радиальный гемолиз [324]
    5.4. Обнаружение специфических IgM к вирусу краснухи методом «захвата» антител (antibody-capture technique) [327]
  6. Благодарности [330]
      Литература [331]
Предметный указатель [332]
Указатель латинских названий [338]
Формат: djvu
Размер:7544948 байт
Язык:RUS
Рейтинг: 324 Рейтинг
Открыть: