Лимфоциты. Методы

Автор(ы):Клаус Дж.
06.10.2007
Год изд.:1990
Описание: Методическое пособие, написанное авторитетными учеными. Подробно рассматривается выделение лимфоцитов из разных источников, методы очистки клеток и определение их жизнеспособности, разделение на субпопуляции, культивирование, анализ функциональной активности (определение ряда лимфокинов), характеристика поверхностных белков. Для иммунологов, гематологов, молекулярных биологов, биохимиков.
Оглавление:
Лимфоциты. Методы — обложка книги.
От редактора перевода [5]
Предисловие [7]
Список авторов [9]
Список сокращений [11]
Глава 1. Выделение лимфоцитов и вспомогательных клеток. С. Хат [15]
  1. Общие предпосылки [15]
    1.1. Источники лимфоидиых клеток [15]
      1.1.1. Первичные лимфоидные органы [15]
      1.1.2. Вторичные лимфоидные органы [17]
      1.1.3. Линии лимфоидных клеток [18]
    1.2. Суспензии клеток, полученные из солидных лимфоидных органов [18]
    1.3. Гетерогенность А-клеток [20]
      1.3.1. Макрофаги [21]
      1.3.2. Дендритные клетки [22]
      1.3.3. Фолликулярные дендритные клетки (ФДК) [25]
      1.3.4. Миеломоноцитариые линии клеток [25]
    1.4. Условия выделения клеток [26]
      1.4.1. Температура [26]
      1.4.2. Величина рН, осмотического давления и содержание в среде питательных веществ, необходимых клеткам [27]
      1.4.3. Механическое повреждение клеток. Центрифугирование [29]
  2. Выделение клеток из жидкостей организма [29]
    2.1. Кровь [29]
    2.2. Лимфа [31]
      2.2.1. Канюлирование грудного лимфатического протока у крысы [32]
      2.2.2. Мезентериальная лимфаденэктомия [36]
    2.3. Смыв из перитоиеальной полости [36]
    2.4. Смыв из бронхов и другие источники клеток [38]
  3. Выделение клеток из солидных органов [39]
    3.1. Селезенка [39]
    3.2. Лимфатические узлы [40]
    3.3. Миндалины [41]
    3.4. Лимфоидная ткань кишечника [42]
    3.5. Тимус [43]
    3.6. Печень плода [43]
    3.7. Костный мозг [44]
    3.8. Выделение клеток из лимфоидных органов лабораторных грызунов [45]
    3.9. Выделение клеток костного мозга [48]
    3.10. Конечные этапы получения клеточных взвесей, общие для всех методов [49]
  4. Простые приемы очистки клеток [50]
    4.1. Погибшие клетки [50]
      4.1.1. Определение жизнеспособности клеток [50]
      4.1.2. Устранение погибших клеток [51]
    4.2. Устранение эритроцитов при помощи гемолиза [52]
    4.3. Разделение клеток в градиенте плотности [53]
      4.3.1. Центрифугирование в ступенчатом градиенте плотности альбумина (модифицировано Дж. Остиным (J. Austyn) —личное сообщение) [55]
    4.4. Разделение клеток по адгезивности [55]
      4.4.1. Макрофаги [56]
      4.4.2. Дендритные клетки [57]
      4.4.3. Выделение дендритных клеток с помощью дифференциальной адгезии к полистироловой поверхности [58]
      4.4.4. Выделение макрофагов по адгезивности [59]
      4.4.5. Устранение из взвеси адгезивных клеток на колонке [59]
      4.4.6. Выделение Т-клеток на колонке из найлоиовой ваты [60]
  5. Подсчет клеток [60]
    5.1. Гемоцитометр (счетная камера) [60]
    5.2. Определение числа клеток с помощью электронного счетчика частиц [61]
  6. Благодарности [63]
  7. Приложение [63]
        Литература [65]
Глава 2. Выделение различных субпопуляций лимфоцитов. Д. Мейсон, Дж. Пенхейл, Дж. Седжуик [69]
  1. Введение [69]
  2. Проточная цитофлуорография и сортировка клеток [70]
    2.1. Принципы фенотипического анализа клеток [70]
    2.2. Сортировка клеток [75]
    2.3. Практический подход к сортировке клеток [75]
      2.3.1. Работа с клеточной суспензией [75]
      2.3.2. Сортировка клеток в стерильных условиях [76]
      2.3.3. Маркирование клеток антителами, связанными с флуоресцеина [77]
    2.4. Выход, чистота и производительность сортировки клеток [78]
    2.5. Приготовление конъюгированных антител [79]
      2.5.1. Конъюгация очищенных антител с изотиоцианатом флуоресцеина [79]
      2.5.2. Метод биотинирования очищенных антител по Б. Роузе (В. Poser) [80]
  3. Розетирование [80]
    3.1. Принцип [81]
    3.2. Приготовление раствора хлорного хрома [81]
    3.3. Приготовление взвеси эритроцитов барана, нагруженных антителами [81]
    3.4. Разделение клеток [82]
      3.4.1. Стандартный метод [82]
      3.4.2. Удаление из суспензии редко встречающихся клеток [85]
      3.4.3. Прямое розетирование [86]
    3.5. Разделение клеток розетированием для последующей эксплантации [86]
  4. Разделение лимфоцитов на поверхности пластика, нагруженной антителами к иммуноглобулинам («пэининг») [87]
    4.1. Принцип [87]
    4.2. Методы [87]
      4.2.1. Выделение В-клеток прямым методом путем положительной селекции [87]
      4.2.2. Выделение В-клеток непрямым методом путем отрицательной селекции [89]
      4.2.3. Очистка Т-клеток и их субпопуляций путем последовательного пэннинга [89]
    4.3. Общие замечания [91]
  5. Разделение субпопуляций лимфоцитов путем комплемент-опосредованного цитолиза [91]
    5.1. Конкретное описание метода [92]
      5.1.1. Реагенты и оборудование [92]
      5.1.2. Одноэтапный вариант метода [92]
      5.1.3. Двухэтапный вариант метода [92]
    5.2. Практические и теоретические соображения [93]
  6. Сравнительная оценка различных методов фракционирования клеток [94]
        Литература [95]
Глава 3. Фракционирование лимфоцитов при помощи иммуномагнитных микробус. С. Фундеруд, X. Нустад, Т. Ли, Ф. Вартдаль, Г. Гейдернек, П. Стенстад, Й. Угельстад [97]
  1. Введение [97]
    1.1. Полимерные магнитные микробусы стандартного размера [97]
    1.2. Общие принципы разделения лимфоцитов [98]
  2. Реагенты и приборы [100]
    2.1. Среды и посуда для культивирования клеток [100]
      2.1.1. Приборы [100]
      2.1.2. Микробусы «Дюнабидс М-450» [100]
    2.2. Приготовление антител [101]
      2.2.1. Поликлональные антитела к IgG мыши [101]
      2.2.2. Моноклинальные IgM [101]
      2.2.3. Моноклональные IgG [101]
    2.3. Адсорбция антител на микробусах «Дюнабидс М-450» [102]
      2.3.1. Адсорбция поликлоиальных IgG на микробусах «Дюиабидс М-450» [103]
      2.3.2. Адсорбция моноклинальных IgM мыши на микробусах «Дюнабидс М-450» [103]
      2.3.3. Иммуноадсорбция моиоклональных IgG мыши на микробусах «Дюнабидс М-450», нагруженных антителами овцы или козы к IgG мыши [104]
  3. Разделение лимфоцитов [104]
    3.1. Методы положительной селекции лимфоцитов [105]
      3.1.1. Выделение лимфоцитов прямыми методами [106]
      3.1.2. Выделение лимфоцитов непрямым методом [108]
    3.2. Удаление из взвеси определенных клеточных популяций [109]
        Литература [110]
Глава 4. Иммунофлуоресценция и иммуногистохимия. Дж. Джаносси и П. Амлот [112]
  1. Введение [112]
  2. Выделение мононуклеарных клеток из крови и костного мозга [116]
    2.1. Принцип [116]
    2.2. Реагенты и посуда [116]
    2.3. Выделение моноиуклеарных клеток [117]
    2.4. Примечания [117]
  3. Иммунофлуоресцентное маркирование клеток в панелях для микротитрования (микропанельный ИФА) [118]
    3.1. Принцип [118]
    3.2. Реагенты и лабораторные принадлежности из стекла и пластика [119]
    3.3. Приборы [122]
    3.4. Постановка микропанельного ИФА [122]
    3.5. Примечания [123]
    3.6. Интерпретация результатов [123]
  4. Иммунофлуоресцентный анализ суспензий клеток лимфатических узлов [125]
    4.1. Принцип [125]
    4.2. Реагенты и приборы [125]
    4.3. Приготовление взвеси клеток лимфоидной ткани [125]
    4.4. Примечания [126]
  5. Количественная оценка интенсивности флуоресценции клеток, маркированных антителами, конъюгированными с ФИТЦ [126]
    5.1. Принцип [126]
    5.2. Реагенты и принадлежности [127]
    5.3. Приборы и обеспечение [127]
    5.4. Количественный Иммунофлуоресцентный анализ [127]
    5.5. Комментарии [132]
    5.6. Интерпретация результатов [135]
  6. Блокада неспецифического присоединения моноклональных антител к Fc-рецепторам [136]
    6.1. Принцип [136]
    6.2. Реагенты и лабораторные принадлежности [136]
    6.3. Описание метода [136]
    6.4. Интерпретация результатов и примечания [137]
  7. Двухцветный ИФА [137]
    7.1. Принцип [137]
    7.2. Реагенты [141]
    7.3. Прямой двухцветный ИФА с использованием антител, флуоро-хромированных ФИТЦ и ФЭ [142]
    7.4. Примечание [142]
    7.5. Дополнительное двухцветное (ФИТЦ и ТРИТЦ) маркирование клеток при микропанельном ИФА [143]
    7.6. Комментарии и интерпретация результатов [144]
    7.7. Контроль специфичности реагентов, используемых в непрямом двухцветном ИФА [145]
    7.8. Примечания [145]
  8 Двухцветный ИФА, основанный на взаимодействии биотин—авидин [146]
    8.1. Принцип [146]
    8.2. Реагенты [146]
    8.3. Описание метода [146]
    8.4. Примечание [147]
  9. Исследование клеток в мазках и препаратах, приготовленных с помощью цитоцентрифуги [147]
    9.1. Принцип [147]
    9.2. Реагенты и лабораторные принадлежности [149]
    9.3. Приборы [149]
    9.4. Метод двухцветного одновременного маркирования мембранных и цитоплазматических антигенов [150]
    9.5. Примечания [151]
    9.6. Интерпретация результатов микроскопического исследования [152]
  10. Иммуноцитохимический анализ срезов тканей [153]
    10.1. Принципы [153]
    10.2. Реагенты [154]
    10.3. Приготовление срезов из тканей [155]
    10.4. Приготовление срезов из замороженных тканей [156]
    10.5. Обработка парафиновых срезов [157]
    10.6. Обработка парафиновых срезов [157]
    10.7. Обработка предметных стекол поли-L-лизином [158]
  11. Иммуиопероксидазный метод [158]
    11.1. Принципы [158]
    11.2. Реагенты и лабораторные принадлежности [158]
    11.3. Описание методов [159]
    11.4. Комментарии [161]
    11.5. Интерпретация результатов микроскопического исследования [162]
  12. Иммуиоферментное маркирование комплексами щелочная фосфатаза — антитела к щелочной фосфатазе (ЩФ — АЩФ) [163]
    12.1. Принцип [163]
    12.2. Реагенты [163]
    12.3. Описание метода [164]
    12.4. Интерпретация результатов микроскопического исследования [165]
  13. Система авидин—биотин [166]
    13.1. Принцип [166]
    13.2. Реагенты [167]
    13.3. Описание метода [167]
    13.4. Интерпретация результатов микроскопического исследования [168]
  14. Двойное маркирование тканей [168]
    14.1. Принцип [168]
    14.2. Реагенты [169]
    14.3. Описание метода [169]
    14.4. Интерпретация результатов микроскопического исследования [170]
  15. Благодарности [172]
        Литература [173]
Глава 5. Индукция и количественное определение клеток, образующих антитела in vitro. Д. Гилберт и Д. Дрессер [176]
  1. Введение [176]
  2. Индукция клеток, образующих антитела in vitro [176]
    2.1. Иммунизация спленоцитов мыши in vitro [177]
      2.1.1. Иммунизация спленоцитов мыши in vitro эритроцитами барана (ЭБ) [177]
      2.1.2. Дополнительные компоненты среды или лимфокииы [178]
      2.1.3. Образование антител в ответ на различные иммуио-гены [179]
      2.1.4. Роль сывороточных факторов [179]
      2.1.5. Посуда для клеточных культур [181]
      2.1.6. Использование камер Марбрука [181]
    2.2. Иммунизация лимфоцитов человека in vitro [182]
      2.2.1. Иммунизация ЛПК человека ЭБ in vitro [183]
      2.2.2. Иммунизация другими антигенами [184]
      2.2.3. Использование других неспецифических стимуляторов образования антител [184]
      2.2.4. Эффект лимфокинов, добавленных в среду [184]
      2.2.5. Сывороточные факторы [185]
      2.2.6. Дополнительные варианты условий культивирования [185]
      2.2.7. Дополнительные примечания [185]
      2.2.8. Иммунизация in vitro клеток селезенки или миндалин человека [186]
    2.3. Иммунизация in vitro лимфоцитов других видов животных [186]
  3. Количественное определение клеток, секретирующих антитела [187]
    3.1. Метод локального гемолиза [187]
      3.1.1. Общее описание [187]
      3.1.2. Определение клеток, образующих антитела, в жидкой среде [188]
      3.1.3. Дополнительные пояснения [189]
      3.1.4. Локальный гемолиз в геле [190]
      3.1.5. Неэритроцитариые антигены [193]
      3.1.6. Обратный локальный гемолиз [196]
      3.1.7. Комментарии общего характера [198]
    3.2. Методы, основанные на формировании негемолитических зон [200]
      3.2.1. Локальный лизис клеток-мишеней, имеющих ядра [200]
      3.2.2. Выявление зон ингибиции размножения фага (метод ZIPP) [201]
      3.2.3. Метод иммуноферментных (ELISA) зон «Элиспот» [201]
    3.3. Приготовление взвеси лимфоидных клеток [203]
    3.4. Антииммуноглобулиновые сыворотки (антиглобулиновые реагенты) [204]
  4. Благодарности [204]
        Литература [204]
Глава 6. Культивирование линий и клонов Т-клеток in vitro. П. Тейлор, Д. Томас, К. Миллз [208]
  1. Введение [ 208]
    1.1. Различные стратегии получения линий ЦТЛ и Т-хелперов [209]
  2. Приготовление суспензий лимфоидных клеток [210]
    2.1. Культуральиая среда и условия культивирования [210]
    2.2. Приготовление клеточных взвесей селезенки и лимфатических узлов [210]
    2.3. Подсчет живых клеток [211]
      2.3.1. Окрашивание акридиновым оранжевым (АО) и бромистым этидием (БЭТ) [211]
      2.3.2. Окрашивание динатриевой солью эозина [211]
    2.4. Удаление погибших клеток с помощью центрифугирования в градиенте плотности метризамида [211]
    2.5. Приготовление клеток-мишеней для ЦТЛ [212]
      2.5.1. Получение клеток пернтонеального экссудата, индуцированного тиогликолятом (ТГ) [212]
      2.5.2. Получение В- или Т-лимфобластрв [212]
    2.6. Облученные клетки селезенки [213]
  3. Продукция ИЛ-2 [213]
    3.1. Кон А-надосадок [213]
    3.2. Надосадок тимомы EL4 [214]
    3.3. Ауто-ИЛ-2 [215]
  4. Получение линий Т-хелперов [215]
    4.1. Примирование Т-хелперов in vivo растворимыми белковыми антигенами [12] [215]
    4.2. Инициация и поддержание линий Т-хелперов [216]
  5. Получение линий цитотоксических Т-лимфоцитов [216]
    5.1. Получение примированных ЦТЛ [216]
    5.2. Инициация линий цитотоксических Т-лимфоцитов [217]
  6. Клонирование Т-клеток [218]
    6.1. Клонирование методом лимитирующих разведений [218]
    6.2. Размножение клоиировалных клеток [219]
  7. Селекция Т-хелперов путем самоустранения клонов посторонней специфичности [220]
  8. Анализ Т-хелперов [221]
    8.1. Оценка пролиферативного ответа [222]
    8.2. Определение ИЛ-2 [222]
  9. Определение цитотоксической активности [223]
    9.1. Подготовка ЦТЛ [224]
    9.2. Приготовление и маркирование клеток-мишеней (?)Сr [225]
    9.3. Оценка активности ЦТЛ [225]
    9.4. Примечание [226]
  10. Определение поверхностных антигенов Т-клеток методом непрямого резеткообразования [226]
    10.1. Присоединение антнглобулиновых антител к бычьим эритроцитам [227]
    10.2. Связывание МКА с Т-клетками [227]
    10.3. Образование и подсчет розеток [227]
  11. Анализ МНС-рестрикции [228]
  12. Примечание, сделанное в корректуре [228]
        Литература [229]
Глава 7. Получение линий лимфобластоидиых В-клеток человека с помощью вируса Эпштейна—Барр. Э. Уоллз и Д. Крофорд [230]
  1. Введение [230]
    1.1. Вирус Эпштейна—Барр [230]
    1.2. Линии лимфобластоидных В-клеток [230]
  2. Принципы метода [233]
    2.1. Получение вируса [233]
    2.2. Правила работы с ВЭБ в лаборатории [233]
    2.3. Взаимодействие ВЭБ с В-лимфоцитами [234]
    2.4. Необходимость вспомогательных и питающих клеток [234]
    2.5. Регуляция Т-лимфоцитами размножения В-лимфоцитов, инфицированных ВЭБ [234]
  3. Описание методов [235]
    3.1. Получение вируса [235]
      3.1.1. Культуральная среда [235]
      3.1.2. Индуцирующие агенты [235]
      3.1.3. Культивирование клеток В95-8 [235]
      3.1.4. Приготовление содержащих ВЭБ препаратов из культуральной жидкости клеток В95-8 [236]
      3.1.5. Титрование препаратов ВЭБ на мононуклеарных клетках пуповинной крови [236]
      3.1.6. Предосторожности при работе с ВЭБ и иммортализованными линиями клеток [237]
    3.2. Приготовление клеток-мишеней для заражения [239]
      3.2.1. Среда для отмывания клеток [239]
      3.2.2. Осаждение эритроцитов пуповинной крови декстраном [239]
      3.2.3. Выделение мононуклеарных клеток и удаление Т-лимфоцитов [239]
    3.3. Получение иммортализованных линий клеток с помощью ВЭБ [240]
      3.3.1. Приготовление циклоспорина А [240]
      3.3.2. Заражение ВЭБ и культивирование [240]
      3.3.3. Обратное развитие очагов пролиферации В-лимфоцитов, демонстрирующее Т-клеточный иммунитет в отношении ВЭБ [240]
    3.4. Наращивание клеток и криоконсервация клеточных линий [241]
      3.4.1. Среда и ампулы для замораживания [241]
      3.4.2. Наращивание ЛЛВК [241]
      3.4.3. Замораживание и оттаивание лимфобластоидных клеток [241]
    3.5. Иммунофлуоресцентное выявление ядерных антигенов ВЭБ в реакции связывания комплемента [242]
      3.5.1. Реагенты [242]
      3.5.2. Приготовление мазков из суспензии клеток [243]
      3.5.3. Иммунофлуоресцентное окрашивание антителами к СЗ [243]
    3.6. Иммуноферментное выявление ядерных антигенов ВЭБ в реакции связывания комплемента [244]
      3.6.1. Реагенты [244]
      3.6.2. Выявление комплемента конъюгатом пероксидазы с антителами к СЗ [244]
  4. Проблемы [245]
    4.1. Проблемы, св]язанные с вирусом [246]
    4.2. Клетки-мишени [247]
    4.3. Выявление ядерных антигенов ВЭБ в клеточных линиях [247]
    4.4. Условия культивирования [247]
  5. Возможности применения линий лимфобластоидных В-клеток [248]
        Литература [248]
Глава 8. Метод лимитирующих разведений. Г. Уолдман, С. Кобболд и И. Лефковитс [250]
  1. Введение [250]
  2. Теоретические предпосылки метода [251]
    2.1. Одноударные кривые и расчет частоты [251]
    2.2. Анализ по распределению в предельном разведении [254]
  3. Описание метода АПР [256]
    3.1. Введение [256]
    3.2. Анализ в предельном разведении Т-хелперов [256]
      3.2.1. Получение Т-хелперов [256]
      3.2.2. Получение В-клеток памяти [258]
      3.2.3. Культуральная среда [258]
      3.2.4. Культивирование клеток [258]
      3.2.5. Радиоиммунологический анализ образцов культуральной надосадочной жидкости [259]
      3.2.6. Оценка надежности системы [262]
      3.2.7. Применение АПР для доказательства моногамности межклеточных взаимодействий отдельной Т-клетки [264]
    3.3. Обзор систем, позволяющих исследовать с помощью АПР другие функции лимфоцитов [268]
      3.3.1. Созревание В-клеток (клональная дифференцировка) [268]
      3.3.2. Т-хелперы [268]
      3.3.3. Т-супрессоры [269]
      3.3.4. Цитотоксические Т-лимфоциты и их предшественники [269]
      3.3.5. Наблюдение за динамикой Т-клеток в процессе лечения (мониторинг) [270]
  4. Методы статистической обработки результатов АПР [270]
  5. Приложение 1 [271]
    5.1. Полная распечатка программ для статистической оценки результатов метода лимитирующих разведений на микрокомпьютерах ВВС [271]
  6. Приложение 2 (на английском и русском языках) [277]
    6.1. Example output from running the limiting dilution analysis program [277]
        Литература [284]
Глава 9. Анализ пролиферации лимфоцитов. С. Найт [286]
  1. Введение [286]
  2. Исходный вариант метода культивирования в висячих каплях [287]
    2.1. Культуральные среды и добавки [287]
      2.1.1. Среда [287]
      2.1.2. Добавление сыворотки [288]
    2.2. Культивирование в висячих каплях [290]
      2.2.1. Закладка капельных культур [290]
      2.2.2. Культивирование [291]
    2.3. Использование [(?)Н]-тимидииа [292]
      2.3.1. Количество добавляемого тимидина [292]
      2.3.2. Удельная активность [(?)Н]-тимидина [292]
      2.3.3. Добавление [(?)Н]-тимидина в культуры [293]
    2.4. Сбор клеток [294]
      2.4.1. Нарезание фильтровальных дисков [294]
      2.4.2. Сбор клеток [294]
    2.5. Планирование эксперимента и анализ данных [296]
  3. Результаты [297]
    3.1. Воспроизводимость метода [297]
    3.2. Ответы на митоген [299]
    3.3. Ответы иа антиген [303]
    3.4. Ответы в смешанных культурах лимфоцитов (СКЛ) [304]
  4. Благодарности [307]
        Литература [309]
Глава 10. Анализ интерлейкинов и других подобных им факторов. А. Хамблин и А. О'Гарра [310]
  1. Введение [310]
    1.1. Интерлейкины, действующие на Т-лимфоциты [311]
    1.2. Интерлейкины, действующие на В-лимфоциты [312]
  2. Иитерлейкин 1 [313]
    2.1. Источники [313]
    2.2. Получение ИЛ-1 из моноцитов периферической крови человека [314]
    2.3. Определение ИЛ-1 в культуре мышиных тимоцитов [314]
  3. Интерлейкпн 2 [316]
    3.1. Источники [316]
    3.2. Определение ИЛ-2 в культуре клеток CTLL [317]
      3.2.1. Культивирование клеток мышиной линии CTLL [317]
      3.2.2. Определение [317]
    3.3. Определение ИЛ-2 на лимфобластах человека. Модификация ранее описанного метода [317]
      3.3.1. Получение лимфобластов человека [317]
      3.3.2. Выделение лимфобластов в градиенте плотности перколла. Модификация ранее описанного метода [318]
      3.3.3. Определение ИЛ-2 на лимфобластах [319]
  4. Интерлейкпн 3 (ИЛ-3) [319]
    4.1. Источники [320]
    4.2. Определение ИЛ-3 по пролиферации клеточных линий [320]
    4.3. Определение колониестимулирующей активности [321]
  5. Иитерлейкин 4 [321]
    5.1. Источники [322]
    5.2. Определение ИЛ-4, основанное на комитогенном эффекте [323]
    5.3. Определение ИЛ-4 по усилению экспрессии la-белков [324]
    5.4. Определение ИЛ-4 по индукции образования Ig(?) [324]
    5.5. Определение ИЛ-4 по индукции образования IgE [325]
    5.6. Определение ИЛ-4 по активности фактора роста тучных клеток (ФРТуК) [325]
    5.7. Определение ИЛ-4 по активности фактора роста Т-клеток [326]
  6. Интерлейкин 5 [326]
    6.1. Эффекты ИЛ-5 на клетки BCL(?)-лимфомы [327]
      6.1.1. Выращивание ВСL(?)-лимфомы [327]
      6.1.2. Определение ИЛ-5 на клетках BCL(?) [327]
      6.1.3. Стандартизация взвеси клеток BCL(?) [328]
    6.2. Биологическое действие ИЛ-5 на нормальные В-клетки [328]
      6.2.1. Определение ИЛ-5 по биологическому действию иа большие В-лимфоциты [328]
      6.2.2 Определение фактора, заменяющего Т-клетки (ФЗТ) [330]
    6.3. Активность фактора дифференцировки эозннофилов (ФДЭ) [331]
      6.3.1. Получение личинок М. corti [331]
      6.3.2. Определение фактора дкфференцировки эозинофилов [332]
      6.3.3. Подсчет эозииофилов [332]
      6.3.4. Определение эозинофилов по пероксидазной активности [332]
    6.4. Заключительный комментарий [333]
  7. В-клеточный стимулирующий фактор-2 (BSF-2, В cell-stimulating factor-2) [333]
    7.1. Источники [333]
    7.2. Индукция синтеза иммуноглобулинов нормальными В-клеткамн под действием BSF-2 [334]
    7.3. Индукция синтеза иммуноглобулинов В-клетками трансформированных ВЭБ линий [335]
  8. Стандартизация методов определения лимфокинов [335]
        Литература [336]
Глава 11. Анализ биохимических свойств антигенов лимфоцитарной поверхности. А. Дейвис и М. Браун [339]
  1. Введение [339]
  2. Иммунопреципитация [340]
    2.1. Введение [340]
    2.2. Радиомаркирование клеток [346]
      2.2.1. Иодирование белков клеточной поверхности с помощью лактопероксидазы [346]
      2.2.2. Биосинтетическое маркирование белков (?)[S]-метионином [347]
      2.2.3. Маркирование (?)Р [348]
    2.3. Иммунопреципнтация с помощью взвеси клеток Staphylococcus aureus [349]
      2.3.1. Необходимые реагенты [349]
      2.3.2. Получение клеточного лизата [349]
      2.3.3. Предварительная очистка лизата [350]
      2.3.4. Иммунопреципитация [351]
      2.3.5. Отмывание [351]
      2.3.6. Подготовка иммунопреципитата к ДСН-ПАГЭ [352]
    2.4. Иммунопреципитация с помощью гранул геля сефарозы, нагруженных стафилококковым белком А [352]
      2.4.1. Приготовление взвеси гранул геля протеин А — сефарозы (Pharmacia Fine Chemicals, Швеция) [352]
      2.4.2. Иммунопреципитация [352]
      2.4.3. Отмывание [352]
      2.4.4. Подготовка иммунопреципитата к ДСН-ПАГЭ [358]
    2.5. Иммунопреципитация с помощью антител, непосредственно присоединенных к гранулам геля сефарозы [353]
    2.6. Сравнение разных вариантов метода иммуиопреципитации между собой [353]
    2.7. Примеры использования иммунопреципитации [354]
      2.7.1. Анализ характера гликозилирования [354]
      2.7.2. Сравнение исследуемого антигена с известными [356]
  3. Иммуноблоттинг [359]
    3.1. Введение [359]
    3.2. Основной метод [360]
    3.3. Исследуемый образец [361]
    3.4. Набор белков-калибрантов молекулярной массы [362]
    3.5. Гель [364]
    3.6. Перенос белков [364]
      3.6.1. Приборы и принадлежности [364]
      3.6.2. Буферные растворы [364]
      3.6.3. Приготовление «сэндвича» [365]
      3.6.4. Условия переноса белков [366]
    3.7. Выявление антигена, перенесенного на мембрану [366]
      3.7.1. Выявление белков, перенесенных на мембрану [367]
      3.7.2. Выявление специфического антигена [368]
  4. Электрофорез в полиакриламидном геле, содержащем додецилсульфат натрия (ДСН-ПАГЭ) [371]
    4.1. Введение [371]
    4.2. Необходимые реагенты и приборы [371]
    4.3. Описание метода [371]
  5. Благодарности [373]
        Литература [374]
Поставщики реактивов и оборудования [375]
Предметный указатель [377]
Формат: djvu
Размер:3946195 байт
Язык:RUS
Рейтинг: 388 Рейтинг
Открыть: