Биология развития млекопитающих. Методы.

Автор(ы):Манк М.
06.10.2007
Год изд.:1990
Описание: В методическом руководстве освящена вся совокупность подходов, применяемых при изучении ранних эмбрионов млекопитающих (в том числе и человека). Приведены методики культивирования эмбрионов, анализа хромосом, маркерных ферментов, клонирования кДНК, получения трансгенных животных, оплодотворения ооцитов и культивирования предимплантационных эмбрионов человека. Для эмбриологов, молекулярных биологов, студентов-биологов и др.
Оглавление:
Биология развития млекопитающих. Методы. — обложка книги. Обложка книги.
Предисловие редактора перевода [5]
Предисловие [7]
Список сокращений [8]
Введение [10]
Глава 1. Разведение мышей. Колин Хедерингтон [13]
  1. Введение [13]
  2. Разведение [13]
    2.1. Источник мышей и общая оценка их здоровья [13]
    2.2. Клетки [14]
    2.3. Подстилка [14]
    2.4. Питание [15]
    2.5. Вода [15]
    2.6. Среда обитания [15]
    2.7. Дезинфекция помещений [16]
  3. Обращение с мышью [17]
    3.1. Подход [17]
    3.2. Идентификация [17]
    3.3. Инъекции [18]
    3.4. Умерщвление [18]
  4. Разведение [19]
  5. Эксперименты [19]
    5.1. Самцы-производители [19]
    5.2. Получение мышей с известным сроком беременности [20]
    5.3. Ложная беременность и вазэктомия [20]
    5.4. Суперовуляция [21]
    5.5. Анестетики [22]
    5.6. Получение потомства путем гистерэктомии [23]
    5.7. Усыновление [24]
  6. Транспортировка [25]
  7. Ввоз [26]
  8. Правила работы с лабораторными животными [26]
      Литература [26]
Глава 2. Эксперименты с предимплантационными эмбрионами мыши. Хестер Пратт [27]
  1. Введение [27]
  2. Извлечение эмбрионов [27]
    2.1. Оплодотворенные и неоплодотворенные яйцеклетки [28]
    2.2. Стадии дробления (от 2 до 8-клеточной) [33]
    2.3. Морулы [35]
    2.4. Бластоцисты [37]
  3. Манипуляция с эмбрионами и клетками [38]
    3.1. Сортировка эмбрионов по стадиям [38]
    3.2. Сортировка изолированных клеток по стадиям [39]
    3.3. Агрегация эмбрионов и изолированных клеток [45]
    3.4. Выделение внутренних клеток морул или внутренних клеточных масс бластоцист [46]
    3.5. Выделение трофэктодермы [47]
    3.6. Подсчет клеток [48]
  4. Применение меченых лигандов для изучения организации клеток и эмбрионов [50]
    4.1. Мечение клеток и морфология клеточной поверхности [50]
    4.2. Мечение внутриклеточных компонетов [54]
    4.3. Маркеры клеточной линии [57]
  5. Реактивы, среды и оборудование [59]
    5.1. Реактивы [59]
    5.2. Среды [59]
    5.3. Оборудование [59]
      Литература [63]
Глава 3. Эксперименты с постимплантационными эмбрионами мыши. Роза Бэддингтон [65]
  1. Введение [65]
  2. Анатомия гаструляции и раннего эмбриогенеза [65]
  3. Извлечение эмбрионов и классификация стадий их развития [69]
    3.1. Извлечение [69]
    3.2. Классификация стадий развития [69]
  4. Выделение тканей или частей эмбриона [71]
    4.1. Микрохирургические операции на эмбрионах [71]
    4.2. Ферментативное разделение тканей [73]
  5. Культивирование и эктопические трансплантации изолированных тканей и фракций [74]
    5.1. Культивирование [74]
    5.2. Эктопические трансплантации [76]
  6. Культивирование целых эмбрионов [77]
    6.1. Среды [78]
    6.2. Роллерная система [79]
    6.3. Газовый режим [81]
    6.4. Оценка развития [81]
  7. Включение клеток или метки в эмбрионы in vitro [82]
    7.1. Оборудование [83]
    7.2. Приготовление метки или клеток для инъекции [86]
    7.3. Инъекция [87]
  8. Введение клеток или метки в эмбрионы in vivo [88]
  9. Изготовление стеклянных микрохирургических инструментов [92]
    9.1. Стекло [92]
    9.2. Оборудование [93]
    9.3. Инструменты [93]
  10. Заключение [97]
      Литература [97]
Глава 4. Анализ мейоза в половых клетках человека и мыши, Энн Чендлей [99]
  1. Введение [99]
  2. Получение препаратов мейотических хромосом высушиванием на воздухе [99]
    2.1. Метод суховоздушиых препаратов для мышей [100]
    2.2. Модификация методики при работе с человеческим материалом [101]
    2.3. Рутинная окраска [102]
    2.4. С-окраска [103]
    2.5. Q-окраска [105]
    2.6. Картирование пахитениых хромосом [105]
    2.7. Использование высушенных на воздухе мужских мейотических препаратов для молекулярных анлизов [108]
  3. Приготовление препаратов женских мейотических хромосом высушиванием на воздухе [109]
    3.1. Профаза мейоза [109]
    3.2. Препараты ооцитов MI и МII, полученные при культивировании in vitro [110]
    3.3. Препараты ооцитов в МII после овуляции [113]
  4. Микрораспластывание для профазиого анализа [114]
    4.1. Поверхностное распластывание для электронно-микроскопического анализа сперматоцитов [114]
    4.2. Распластывание для последовательного анализа в световом и электронном микроскопах [117]
    4.3. Распластывание ооцитов [121]
      Литература [123]
Глава 5. Кариотипирование и определение пола гамет, эмбрионов и плодов; гибридизация хромосом. Е. П. Эванс [125]
  1. Введение [125]
  2. Основные методы [125]
  3. Оборудование [126]
  4. Препараты хромосом из эмбрионов и плодов [127]
    4.1. Препараты из зигот [127]
    4.2. Приготовление препаратов из зародышей предим-плантациоииых стадий [128]
    4.3. Препараты зародышей постимплаитациониых стадий [132]
  5. Окрашивание хромосомных препаратов [134]
    5.1. Хромосомы мыши после рутинной окраски [134]
    5.2. С-окрашеииые препараты и их использование для идентификации Y-хромосомы [135]
    5.3. G-окрашеиные препараты и их анализ [137]
    5.4. Окрашивание неактивной Х-хромосомы [141]
    5.5. Окрашивание для выявления полового хроматина [143]
  6. Гибридизация хромосом [144]
    6.1. Культура эмбриональных фибробластов и репликационная окраска [144]
    6.2. Методы пред- и постокрашиваиия [148]
    6.3. Оценка метки [149]
      Литература [151]
Глава 6. Методы маркирования клеток и их применение. Б. А. Дж. Пондер [153]
  1. Введение [153]
  2. Химеры [155]
    2.1. Определение понятия «химера» [155]
    2.2. Типы химер и их получение [155]
  3. Клеточные маркеры в химерных системах [156]
    3.1. Использование в качестве маркера Н-2-антигенов [159]
    3.2. Другие антигены [166]
    3.3. Полиморфизм углеводов, выявляемый лектинами [168]
    3.4. Использование в качестве маркера лектнна Dolichos (АДБ) [170]
  4. Другие маркеры мозанчности [173]
    4.1. Х-ииактивация [174]
    4.2. Внешние маркеры единичных клеток [174]
    4.3. Соматическая мутация [175]
    4.4. Траисгеиные мыши [175]
  5. Интерпретация результатов маркирования [176]
    5.1. Анализ тканевых экстрактов для выявления мозаичности [176]
    5.2. Анализ видимых мозаичных паттернов [177]
  6. Приготовление тотальных препаратов некоторых эпителиальных тканей [180]
    6.1. Оборудование [180]
    6.2. Кишка [180]
    6.3. Аорта [181]
    6.4. Эпидермис [182]
      Литература [183]
Глава 7. Биохимический микроанализ сцепленных с Х-хромосомой ферментов ГФРТ и ФГК. Мэрилин Манк [185]
  1. Введение [185]
  2. Двойной микроанализ ГФРТ и АФРТ [188]
    2.1. Приготовление образца [189]
    2.2. Реакционная смесь [191]
    2.3. Реакция [192]
    2.4. Прекращение реакции [194]
    2.5. Фильтрация и отмывка [194]
    2.6. Подсчет и графическое изображение результатов [195]
    2.7. Оценка двойного микрометода [196]
  3. Микроанализ ФГК [198]
    3.1. Приготовление образца [204]
    3.2. Электрофорез [204]
    3.3. Окрашивание [207]
    3.4. Количественный анализ активности ФГК-1 и пропорции обоих ферментов [209]
    3.5. Спектрофотометрнческий анализ активности ФГК-1 [210]
    3.6. Чувствительность целлогель-электрофореза в отношении ФГК-1 [211]
    3.7. Разрешение минорной полосы [212]
    3.8. Определение точности колнчественонго анализа изозима [212]
      Литература [213]
Глава 8. Качественный анализ белков на ранних стадиях эмбриогенеза мыши. Сара Хаулет [215]
  1. Введение [215]
  2. Меченне белков раннего эмбриона [218]
    2.1. Метаболическое мечение общих белков [220]
    2.2. Неметаболическое мечение общих белков [222]
    2.3. Фосфопротеины [223]
    2.4. Гликопротеины [224]
    2.5. Выявление синтеза специфических белков [224]
    2.6. Приготовление образцов [226]
    2.7. Количественные измерения включенной метки [227]
  3. Электрофорез в полиакриламидном геле [227]
    3.1. Одномерные гели [228]
    3.2. Изоэлектрическое фокусирование и двумерные гели [230]
  4. Анализ белков, разделенных с помощью электрофореза в геле [233]
    4.1. Обнаружение радиоактивно меченных белков; сравнение методов радиоавтографии и флюорографии [233]
    4.2. Окрашивание общих белков [235]
    4.3. Выявление специфических белков [236]
  5. Заключение [238]
      Литература [238]
Глава 9. Создание библиотек кДНК для предимплантациного эмбриона мыши. Кристина Уотсон, Джози МкКоннел [240]
  1. Введение [240]
  2. Оценка РНК-носителя [242]
  3. Сбор ооцитов и эмбрионов и выделение РНК [243]
    3.1. Сбор ооцитов [243]
    3.2. Сбор предимплантационных эмбрионов [244]
    3.3. Выделение РНК [245]
    3.4. Селекция poly(A)+-PHK и добавление носителя [245]
  4. Конструирование библиотек [245]
    4.1. Выбор вектора [245]
    4.2. Синтез и клонирование двухцепочечных кДНК [246]
  5. Скрининг библиотеки [249]
    5.1. Тест на репрезентативность библиотеки [249]
    5.2. Скрининг библиотеки для выявления специфических последовательностей [250]
      Литература [256]
Глава 10. Гибридизация in situ с мРНК на гистологических срезах. Ребекка Хаффнер и Кейт Уиллисон [257]
  1. Введение [257]
  2. Зонды [258]
    2.1. Выбор зонда [258]
    2.2. Выбор метки [260]
    2.3. Приготовление радиоактивных зондов [261]
    2.4. Расчет удельной активности зонда [261]
    2.5. Оптимальная длина зонда [263]
  3. Подготовка стекол [264]
  4. Фиксация и приготовление срезов [265]
    4.1. Парафиновые срезы [265]
    4.2. Замороженные срезы [265]
  5. Подготовка гистологических срезов для гибридизации [266]
  6. Гибридизация [268]
  7. Постгибридизационные отмывки [268]
  8. Радиоавтография [268]
  9. Проявление препаратов и окрашивание [270]
    9.1. Проявление [270]
    9.2. Окрашивание [271]
    9.3. Заключение препаратов [271]
  10. Микроскопирование [271]
  11. Контроли и артефакты [274]
      Литература [276]
Глава 11. Получение трансгенных мышей. Николас Аллеи, Шейла Бартон, Азим Сурани, Вольф Рейк [278]
  1. Введение [278]
  2. Основная техника [278]
    2.1. Приготовление ДНК для микроинъекции [278]
    2.2. Яйца и эмбрионы [281]
    2.3. Оборудование [283]
    2.4. Изготовление микроинструментов [284]
  3. Микроинъекция [286]
    3.1. Подготовка камеры [286]
    3.2. Подготовка инструментов [287]
    3.3. Инъекция в пронуклеус [287]
    3.4. Возможные затруднения [291]
    3.5. Трансплантация эмбрионов [291]
  4. Скрининг трансгенного потомства [292]
    4.1. Аутопсия хвоста и прищипывание пальца [292]
    4.2. ДНК из плодов [294]
    4.3. Анализ ДНК [295]
    4.4. Трансгенные мыши и замораживание эмбрионов [296]
  5. Перенос генов с помощью ретровнрусов [296]
      Литература [298]
Глава 12. Трансплантация ядер в оплодотворенные и партеногенетически активированные яйца. Ш. Бартон, М. Норрис, А. Сурани [300]
  1. Введение [300]
  2. Основная экспериментальная техника [300]
    2.1. Культивирование [300]
    2.2. Приготовление препарата вируса Сендаи [301]
    2.3. Оборудование [304]
    2.4. Изготовление мнкроинструментов [305]
    2.5. Яйца и эмбрионы [309]
  3. Перенос ядер [311]
    3.1. Установка камеры [311]
    3.2. Установка инструментов [312]
    3.3. Извлечение и перенос ядер [313]
    3.4. Другие варианты переноса ядер [316]
    3.5. Карпопласты с минимальным количеством цитоплазмы [318]
    3.6. Разделение яиц [319]
  4. Оценка результатов [319]
  5. Перспективы и ограничения техники трансплантации ядер яиц млекопитающих [320]
      Литература [321]
Глава 13. Низкотемпературная консервация яиц и эмбрионов мыши. Маури Вуд, Дэвид Уиттингхэм, Уильям Ролл [323]
  1. Введение [323]
  2. Стадии развития [324]
    2.1. Источник ооцитов и эмбрионов [325]
    2.2. Сбор ооцитов и эмбрионов [325]
  3. Замораживание [326]
    3.1. Приготовление образца [327]
    3.2. Криопротектор [330]
    3.3. Индукция образования льда в суспензионной среде: «сидинг» [332]
    3.4. Охлаждение [334]
    3.5. Размораживание [336]
    3.6. Удаление ДМСО после оттаивания [337]
    3.7. Техника безопасности [338]
  4. Нитрификация [338]
    4.1. Верификационный раствор [339]
    4.2. Осмотическое уравновешивание (эквилибрация) эмбрионов в витрификационном растворе [340]
    4.3. Охлаждение [341]
    4.4. Хранение витрифицированных образцов [342]
    4.5. Нагрев [342]
    4.6. Разведение витрификационного раствора [342]
    4.7. Техника безопасности [343]
  5. Хранение образцов [343]
    5.1. Длительность хранения [344]
    5.2. Регистрация [344]
    5.3. Номенклатура [344]
  6. Оценка жизнеспособности консервированного материала [345]
    6.1. Ооциты [345]
    6.2. Оплодотворение in vitro [345]
    6.3. Эмбрионы [349]
    6.4. Перенос эмбриона [350]
    6.5. Общая выживаемость [355]
  7. Криоконсервация ооцитов и эмбрионов человека [355]
      Литература [355]
Глава 14. Оплодотворение ооцитов человека и культивирование человеческих предимплантационных эмбрионов. Питер Брауде [357]
  1. Введение [357]
  2. Источники ооцитов и эмбрионов человека для проведения исследований [357]
    2.1. Получение ооцитов и эмбрионов [357]
    2.2. Донорские ооциты [358]
  3. Сбор ооцитов [359]
    3.1. Лапароскопический сбор ооцитов [359]
    3.2. Инструменты для сбора ооцитов путем лапароскопии [360]
    3.3. Подготовка инструментов для лапароскопии [362]
    3.4. Газы, используемые для лапароскопии [362]
  4. Среды для культивирования эмбрионов и вымывания ооцитов [363]
    4.1. Ионный состав [363]
    4.2. Макромолекулы [364]
    4.3. Вода [364]
    4.4. Масло [367]
    4.5. Антибиотики [368]
    4.6. Газы [369]
    4.7. Температура [369]
  5. Ооциты [369]
    5.1. Манипуляции с ооцитами [369]
    5.2. Градация ооцитов [369]
    5.3. Удаление клеток кумулюса [371]
    5.4. Удаление блестящей оболочки [372]
  6. Сперматозоиды [372]
    6.1. Сбор образца семени [372]
    6.2. Анализ семени [373]
    6.3. Подготовка сперматозоидов для оплодотворения in vitro [377]
  7. Оплодотворение и культивирование эмбрионов [379]
    7.1. Осеменение [379]
    7.2. Доказательство оплодотворения [380]
    7.3. Культивирование оплодотворенных яиц [380]
    7.4. Развитие до стадии бластоцисты [380]
  8. Этические и правовые аспекты [382]
    8.1. Законодательство и научные исследования на человеческих эмбрионах в Великобритании [382]
    8.2. Варнокский комитет [382]
    8.3. Добровольная асоциация экспертов [383]
      Литература [387]
Приложение [389]
Предметный указатель [393]
Формат: djvu
Размер:5142765 байт
Язык:RUS
Рейтинг: 327 Рейтинг
Открыть: