Иммунологические методы исследований

Автор(ы):ред. Лефковитс И. и др.
06.10.2007
Год изд.:1988
Описание: Коллективная монография, написанная видными специалистами в этой области, посвящена методам иммунохимии и клеточной иммунологии. В данную книгу вошли последние, наиболее актуальные методические разработки в области молекулярной и клеточной иммунологии.
Оглавление:
Иммунологические методы исследований — обложка книги. Обложка книги.
Предисловие редактора перевода [5]
Предисловие [7]
Список авторов [9]
Список сокращений [12]
Глава 1. МЕТОДЫ, ПРИМЕНЯЕМЫЕ В МОЛЕКУЛЯРНОЙ ИММУНОЛОГИИ: «ПРОГУЛКА ВДОЛЬ ХРОМОСОМЫ» В ОБЛАСТИ ГЛАВНОГО КОМПЛЕКСА ГИСТОСОВМЕСТИМОСТИ (М. Стейнметц, Д. Стефен, Г. Р. Дастурнику, Э. Джибб и Р. Романюк) [16]
  I. Введение [16]
  II. Материалы [17]
  III. Конструирование космидных библиотек [18]
    A. Частичный гидролиз эукарнотической ДНК [19]
    Б. Фракционирование в сахарозном градиенте [19]
    B. Идентификация фракций, содержащих фрагменты ДНК размером 30—50 kb [21]
    Г. Приготовление «плеч» вектора [22]
    Д. Лигирование фрагментов вектора и эукариотической ДНК [23]
    Е. Упаковка in vitro [24]
    Ж. Титрование [24]
    3. Рассев библиотеки [25]
    И. Получение реплик [25]
    К. Лизис и связывание с ДНК [27]
  IV. Скрининг космидных библиотек [27]
    A. Преинкубация [27]
    Б. Гибридизация [28]
    B. Промывка [29]
    Г. Радиоавтография, проявление, хранение [29]
    Д. Идентификация н отсев положительных колоний [30]
    Е. Повторный скрининг положительных колоний [31]
    Ж. Хранение космидных клонов [31]
  V. Характеристика космидных клонов [32]
    A. Выделение ДНК [32]
    Б. Анализ методом дот-блот [33]
    B. Рестрнкционное картирование [33]
    Г. Выделение зондов для «прогулки вдоль хромосомы» [34]
  VI. Критическая оценка [35]
      Литература [37]
Глава 2. ТРАНСФОРМАЦИЯ ЛИМФОИДНЫХ КЛЕТОК С ПОМОЩЬЮ ДНК (Дж. Мак-Кабрн) [38]
  I. Введение [38]
  II. Доминантные селектируемые маркеры [39]
  III. Методы стабильного переноса генов [40]
    А. Копреципнтация ДНК с фосфатом кальция [40]
    Б. Слияние бактериальных протопластов [42]
  IV. Другие методы стабильного переноса генов [46]
      Литература [46]
Глава 3. КЛОНИРОВАНИЕ кДНК С ПОМОЩЬЮ ВЕКТОРОВ, ОБЕСПЕЧИВАЮЩИХ ЭКСПРЕССИЮ В КЛЕТКАХ-ХОЗЯЕВАХ (М. Хирама) [48]
  I. Введение [48]
  II. Общие подходы и связанные с ними трудности [49]
  III. Экспериментальные процедуры [54]
    A. Материалы общего назначения и исходные растворы [54]
    Б. Получение полисомной мРНК [54]
    B. Подготовка вектора-затравки [58]
    Г. Получение линкеров [61]
    Д. Синтез кДНК [62]
    Е. Циклизация плазмиды с помощью линкера, содержащего oligo(dG)-концевую последовательность [67]
    Ж. Синтез второй цепи кДНК путем замещения мРНК [68]
    3. Трансформация бактерий плазмидой, полученной на этапе III,Ж [68]
    И. Селекция с помощью гибридизации [69]
    К. Индукция триптофанового оперона и получение бактериального экстракта [69]
    Л. Скрининг с помощью антител [70]
  IV. Общие замечания [70]
    A. Метод Хейдекера — Мессинга [70]
    Б. Состыкованные полипептиды [72]
    B. Эукариотическая система [72]
      Литература [73]
Глава 4. КОНСТРУИРОВАНИЕ ВЕКТОРОВ ДЛЯ «ОБРАТНОЙ ГЕНЕТИКИ» ИММУНОГЛОБУЛИНОВ (А. Траунекер) [74]
  I. Введение [74]
  II. Общая стратегия [75]
    А. Векторы для клеточной трансформации [75]
    Б. Обычно используемые векторы [75]
  III. Материалы и исходные растворы [75]
  IV. Экспериментальные процедуры [76]
    A. Экстракция мини-плазмид [76]
    Б. Быстрое препаративное получение плазмид [77]
    B. Очистка фрагментов ДНК в геле легкоплавкой агарозы [80]
    Г. Лигирование выделенных фрагментов с соответствующим вектором [82]
    Д. Получение компетентных бактерий с помощью CaCl(?) [82]
    Е. Трансформация компетентных бактерий [82]
    Ж. Стратегия для отбора генетических конструкций [83]
  V. Примеры конструкций [86]
    А. Конструкции, полученные на основе генов IgM (генов анти-TNP легкой и тяжелой цепи) [86]
    Б. Работа с клонированными генами in vitro [86]
      Литература [86]
Глава 5. МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К СИНТЕЗУ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ (X. Кифер, В. Банварт) [88]
  I. Введение [88]
  II. Основные принципы синтеза [89]
    A. Твердая фаза [89]
    Б. Триэфирный метод [90]
    B. Фосфитный метод [91]
    Г. Защищенные блоки элонгации [92]
    Д. Удаление защитных групп [93]
    Е. Синтез вручную на полимерном носителе [94]
    Ж. Синтезаторы [95]
  III. Экспериментальная часть [97]
    A. Функционализацня стеклянного носителя [97]
    Б. Отщепление цианэтильной группы от триэфиров мономеров и димеров и подготовка к этапу конденсации на носителе [98]
    B. Активация амидитов для реакции на носителе [99]
    Г. Активация и связывание диэфиров [99]
    Д. Проведение реакций в условиях полного отсутствия влаги [99]
    Е. Тритильный анализ [100]
    Ж. Удаление защитных групп и очистка дезоксирнбоиуклеотидов после синтеза на полимерном носителе [100]
  IV. Реагенты и растворители, которые необходимо очищать или готовить [102]
      Литература [103]
Глава 6. ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ (ВЖХ) БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ БЕЛКОВ В НАНО-ГРАММОВЫХ (ПИКОМОЛЬНЫХ) КОЛИЧЕСТВАХ (К. Ройтч, М. Барнес) [104]
  I. Введение [104]
  II. Материалы и методы [105]
    A. Оборудование [105]
    Б. Матрицы для колонок [106]
    B. Определения биологической активности [106]
    Г. Аминокислотный анализ [106]
  III. Разделение по размеру: гель-проникающая хроматография [107]
    A. Введение [107]
    Б. Реагенты и условия элюции [107]
    B. Использование для очистки и характеристики МГФР [108]
    Г. Аналитический вариант [108]
    Д. Переход к препаративному разделению [109]
  IV. Разделение по заряду: хроматография на ионообменных носителях и гидроксиапатите [109]
    А. Ионообменная хроматография (ИОХ) [109]
    Б. Хроматография на гидрокснапатнте [113]
  V. Разделение по гидрофобным свойствам: обратнофазовая хроматография [115]
    A. Введение [115]
    Б. Реагенты и условия элюции [115]
    B. Использование обратнофазовой хроматографии [118]
    Г. Общие замечания для аналитического варианта разделения [121]
    Д. Препаративное выделение [123]
  VI. Количественное определение белка и пределы чувствительности [123]
    А. Введение [123]
    Б. Реагенты и условия элюции [124]
    В. Определение по УФ-поглощению при 280 и 205 нм [125]
    Г. Сравнение ошибок при количественном определении белка по поглощению УФ-света и колориметрическими методами [125]
  VII. Очистка белков [128]
    A. Предварительные замечания [128]
    Б. Некоторые необоснованные представления [129]
    B. Работа с образцом [129]
    Г. Применение [130]
    Д. Препаративное разделение [131]
      Литература [131]
Глава 7. ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ (Джеффри У. Хенсон) [133]
  I. Введение [133]
  II. ВЖХ: теория, практика и оборудование [134]
    A. Теория [134]
    Б. Практика [136]
    B. Оборудование [137]
  III. Использование ВЖХ для очистки и исследования иммуноглобулинов [139]
    A. Общие замечания [139]
    Б. Гель-проникающая ВЖХ (ГП-ВЖХ) [139]
    B. Обратнофазовая ВЖХ (ОФ-ВЖХ) [143]
    Г. ВЖХ на гидроксиапатите (ГА-ВЖХ) [145]
  IV. Обсуждение [148]
      Литература [148]
Глава 8. ПОЛУЧЕНИЕ ЛИПОСОМ, СОДЕРЖАЩИХ МЕМБРАННЫЕ БЕЛКИ ЛИМФОЦИТОВ (Питер Робинсон) [150]
  I. Введение [150]
  II. Выделение мембранных белков [150]
    A. Принцип метода [151]
    Б. Приготовление препаратов клеточных мембран [151]
    B. Выделение мембранных гликопротеинов [152]
    Г. Очистка индивидуальных белков с помощью аффинной хроматографии [153]
  III. Получение липосом [154]
    A. Принцип метода [154]
    Б. Получение клеточных липидов [154]
    B. Синтетические липидные смеси [155]
    Г. Получение липосом с использованием полистирольных гранул SM2 [155]
    Д. Получение липосом после удаления детергента диализом [156]
    Е. Очистка липосом [156]
  IV. Применение [157]
    А. Активация цитотоксических Т-клеток [157]
    Б. Перенос макромолекул за счет слияния липосом с клетками [158]
      Литература [158]
Глава 9. ОБНАРУЖЕНИЕ ГЛИКОЛИПИДНЫХ АНТИГЕНОВ С ПОМОЩЬЮ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ (М. Брокхаус) [159]
  I. Введение [159]
  II. Предварительные тесты [160]
  III. Экстракция липидов [160]
    A. Принцип метода [160]
    Б. Материалы [161]
    B. Процедура экстракции [162]
  IV. Твердофазный РИА [162]
    A. Принцип метода [162]
    Б. Материалы [164]
    B. Процедура определения [165]
  V. Ингнбирование гаптенамн и связывание галтенов [165]
  VI. Тонкослойная хроматография [167]
    A. Принцип метода [167]
    Б. Оборудование [169]
    B. Реактивы [169]
    Г. Обработка антителами [170]
    Д. Химическое окрашивание [171]
  VII. Критическая оценка [171]
      Литература [172]
Глава 10. КАРТИРОВАНИЕ НОВЫХ ДИФФЕРЕНЦИРОВОЧНЫХ АНТИГЕНОВ В-ЛИМФОЦИТОВ (Дж. Мак-Керн, Дж. Хансон) [173]
  I. Введение [173]
  II. Определение антигенных маркеров дифференцнровкн В-клеток с помощью метода негативного отбора [176]
    A. Общие требования к методу определения [176]
    Б. Иммунизация и слияние [180]
    B. Отбор позитивных гибридных клонов [182]
    Г. Клонирование гибридов, секретирующих МА [184]
  III. Анализ антигенных маркеров дифференцировкн В-клеток с помощью двумерного электрофореза [185]
    А. Цель и схема эксперимента [185]
    Б. Техника двумерного электрофореза [187]
  IV. Приложение [189]
      Литература [191]
Глава 11. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СИСТЕМЫ 1SODALT ДВУМЕРНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА ДЛЯ АНАЛИЗА БОЛЬШОГО ЧИСЛА ОБРАЗЦОВ (И. Лефковитс, П. Янг, Л. Кюн, Дж. Кеттмэн, А. Джеммелл, С. Толлаксен, Л. Андерсон, Н. Андерсон) [192]
  I. Назначение метода [192]
  II. Материалы [192]
    А. Оборудование [192]
    Б. Растворы и буферы [200]
  III. Методы [203]
    A. Биосинтетическое введение метки [203]
    Б. Приготовление образцов [205]
    B. Разделение по заряду: ISO-разделение [205]
    Г. Разделение по размеру: DALT-разделение [208]
    Д. Радноавтография и радиофлюорографня [212]
  IV. Критическая оценка [213]
    A. Чувствительность [213]
    Б. Окрашивание серебром или биосинтетическое лечение [214]
    B. Проблема амфолинов [214]
    Г. Электроэндосмос [214]
    Д. Горизонтальное искажение полос [215]
    Е. Сопоставление радиоавтографии и радиофлюорографии 216]
      Литература [216]
Глава 12. ТИПИРОВАНИЕ ТКАНЕЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БИОСИНТЕТИЧЕСКИ МЕЧЕННЫХ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ (К. Ф. Линдал) [217]
  I. Введение [217]
    А. Принцип метода [217]
    Б. Альтернативные методы [217]
  II. Бносинтетическое меченне [218]
    A. Выбор аминокислот и радиоактивного изотопа [218]
    Б. Среды [219]
    B. Биосинтетическое мечение [220]
    Г. Эффективность мечення [220]
  III. Очистка антител [221]
    А. Очистка на колонке с белком А [221]
    Б. Очистка с помощью преципитации [224]
  IV. Активность и стабильность препаратов антител [225]
  V. Тест связывания [226]
  VI. Применение и ограничения метода [227]
      Литература [231]
Глава 13. ТЕСТЫ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ЛИМФОКИНОВ, ПОДДЕРЖИВАЮЩИХ РОСТ В-КЛЕТОК (Томас Леандерсон) [232]
  I. Введение [232]
  II. Материалы [233]
  III. Условия предварительной активации [236]
  IV. Условия рекультивирования [238]
  V. Измерение активности пролиферации [239]
      Литература [240]
Глава 14. СОЗДАНИЕ КЛЕТОЧНОГО МИКРООКРУЖЕНИЯ ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ ПРЕДШЕСТВЕННИКОВ В-КЛЕТОК in vitro (Роланд X. Гислер, Анита Сёдерберг, Фриц Ледерманн) [241]
  I. Введение [241]
  II. Принцип метода [242]
  III. Материалы [243]
    A. Мыши [243]
    Б. Солевые растворы и среды [243]
    B. Микроносители для прикрепляющихся клеток [244]
    Г. Сефадекс G-10 [244]
    Д. Пластиковая культуральная посуда [245]
  IV. Проведение опытов [245]
    A. Сбор клеток костного мозга мыши [245]
    Б. Создание мнкроокруження костномозговых клеток [245]
    B. Приготовление костномозговых предшественников В-клеток [246]
    Г. Созревание культур [247]
    Д. Определение функционально активных В-клеток [247]
  V. Дополнительные замечания [251]
      Литература [252]
Глава 15. ДИФФЕРЕНЦИРОВКА ПРЕДШЕСТВЕННИКОВ В^КЛЕ-ТОК В ПОЛУЖИДКИХ АГАРОВЫХ КУЛЬТУРАХ (К. Дж. Пэйдж, Е. Скарвалл, X. Саутер, С. Мэгазайни) [254]
  I. Введение [254]
  II. Экспериментальные методы [255]
    A. Приготовление агара [256]
    Б. Приготовление среды [257]
    B. Приготовление двухслойных культур [258]
    Г. Обнаружение секретируемых антител [260]
    Д. Стимуляторы и условия роста [263]
  III. Краткий перечень полученных результатов [266]
    A. Частота встречаемости и абсолютное число клоногенных пре-В-клеток в процессе онтогенеза [266]
    Б. Временные характеристики процесса образования зон гемолиза [267]
    B. Фенотип клеточной поверхности [267]
      Литература [267]
Глава 16. ВЫДЕЛЕНИЕ КЛОНОВ АЛЛОРЕАКТИВНЫХ Т-ХЕЛПЕРОВ ЧЕЛОВЕКА И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ИХ В КАЧЕСТВЕ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ АКТИВАТОРОВ В-КЛЕТОК (А. Ланцавечия) [269]
  I. Цель и принцип метода [269]
  II. Материалы [270]
    A. Среда и добавки [270]
    Б. Интерлейкин-2 (ИЛ-2) [270]
    B. Среда для роста Т-клеток (GM) [271]
    Г. Клеточные суспензии [271]
    Д. Источник клеток-стимуляторов [272]
    Е. Иммуноферментный анализ [272]
  III. Методика [273]
    A. Отбор аллореактивных Т-клеток [273]
    Б. Клонирование аллореактнвных Т-клеток [274]
    B. Культивирование клонов аллореактнвных Т-клеток [274]
    Г. Пролнферативный тест [275]
    Д. Хелперный тест активации В-клеток [275]
  IV. Критическая оценка [276]
      Литература [280]
Глава 17. ЦИТОЛИТИЧЕСКИЕ Т-КЛЕТОЧНЫЕ КЛОНЫ И ГИБРИДОМЫ (X. фон Бёмер, В. Хаас) [281]
  I. Введение [281]
  II. Материалы [281]
    A. Сбалансированный солевой раствор [281]
    Б. Среда без Са(?) и Mg(?) [282]
    B. Солевой раствор для ГКН-буфера [282]
    Г. Раствор полнэтиленглнколя (ПЭГ) [282]
    Д. Нормальная среда для культивирования [282]
    Е. Среда, содержащая фактор роста Т-клеток (ФРТК) [283]
    Ж. Селективная среда [283]
  III. Методы [284]
    A. Иммунизация in vivo [284]
    Б. Получение цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) в массовых культурах [284]
    B. Выделение клонов ЦТЛ [285]
    Г. Отделение прикрепившихся клеток от подложки [286]
    Д. Получение цитолитических Т-клеточных гибридом [286]
    Е. Функциональные тесты [290]
    Ж. Выявление заражения микоплазмой и ее ликвидация [291]
    3. Замораживание клонов ЦТЛ [292]
  IV. Применение [293]
    A. Отбор антиген-специфических цитолитическнх Т-клеток in vitro [293]
    Б. Клоны ЦТЛ [294]
    B. Цитолитические Т-клеточные гибридомы [296]
      Литература [299]
Глава 18. УСЛОВИЯ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ in vitro МЫШИНЫХ ЛИНИЙ ПРЕДШЕСТВЕННИКОВ В-КЛЕТОК, ЗАВИСИМЫХ ОТ ИНТЕРЛЕИКИНА-3 (Р. Паласиоз) [301]
  I. Введение [301]
  II. Материалы [302]
  III. Надосадочная жидкость из культур клеток WEHI-3 [304]
  IV. Определение активности ИЛ-3 [304]
  V. Приготовление клеток [306]
    А. Клетки костного мозга [306]
    Б. Клетки селезенки [306]
  VI. Получение ИЛ-3-зависимых линий предшественников В-клеток [307]
    A. Удаление прикрепляющихся клеток [307]
    Б. Размножение клеток [310]
    B. Подавление миелоидного и эритроидного ростков [310]
    Г. Замораживание клеточных линий [311]
  VII. Клонирование ИЛ-3-зависимых предшественников В-клеток [311]
  VIII. Характеристика клеточных линий [312]
  IX. Заключительные замечания [313]
      Литература [314]
Глава 19. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛЕТОК, СИНТЕЗИРУЮЩИХ РЕВМАТОИДНЫЙ ФАКТОР (Дэвид А. Нимэйзи) [315]
  I. Введение [315]
  II. Метод определения зон гемолиза [315]
    A. Антитела-мишени [316]
    Б. Восстановление и алкилирование антител-мишеней [316]
    B. Выбор гаптенной системы [316]
    Г. Конъюгирование арсоната с эритроцитами [317]
    Д. Приготовление комплемента [317]
    Е. Гемолитический тест для скрининга гибридом [317]
    Ж. Количественный гемолитический тест [318]
  III. Метод определения зон гемолиза [319]
    А. Метод Ерне [320]
    Б. Метод Канингема [320]
  IV. Радиоиммунологическнй анализ [321]
    A. Очистка мышиного IgM из асцитной жидкости [322]
    Б. Приготовление антител к (?)-цепям [322]
    B. Иодирование антител к (?)-цепям с помощью хлораминового метода [323]
    Г. Очистка мышиного IgG на ДЭАЭ-целлюлозе [323]
    Д. Адсорбция на пластике [324]
    Е. Инкубация проб [324]
    Ж. Инкубация с мечеными антителами к (?)-цепям [324]
      Литература [325]
Глава 20. МЕТОДЫ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОФЛУОРИМЕТРИИ И СОРТИРОВКИ КЛЕТОК В ИММУНОЛОГИИ (Уильям Лейзерсон) [326]
  I. Введение [326]
  II. Описание клеточного сортера [327]
    A. Оптическая скамья [327]
    Б. Обработка сигналов [329]
    B. Разделение клеток [330]
    Г. Хранение данных [331]
  III. Приготовление реагентов [332]
    А. Специфичность реагентов [332]
    Б. Выбор флуорохрома [332]
  IV. Приготовление образцов [334]
    А. Приготовление клеточных суспензий [334]
    Б. Окрашивание [336]
  V. Разделение клеток [337]
    А. Общие положения [337]
    Б. Стерильные условия [339]
  VI. Получение и накопление данных [340]
    А. Установка окон дискриминации [340]
    Б. Усиление сигнала и его перевод в цифровую форму [342]
  VII. Анализ данных по одному параметру и интерпретация результатов [347]
    A. Представление результатов [347]
    Б. Получение количественных данных [349]
    B. Контроли [352]
  VIII. Примеры [353]
    A. Титрование реагента [353]
    Б. «Слабопозитивные» образцы [353]
    B. Высокий уровень фона [354]
    Г. Артефакты, обусловленные агглютинацией клеток [357]
      Благодарности [357]
      Литература [357]
Глава 21. ТАБЛИЦЫ ДЛЯ ОЦЕНКИ ЭКСПЕРИМЕНТОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДА ЛИМИТИРУЮЩИХ РАЗВЕДЕНИЙ (Ч. Стейнберг, И. Лефковитс) [358]
  I. Введение [358]
  II. Процентное содержание клонов, происходящих из одной клетки [359]
  III. Доверительные интервалы [361]
  IV. Тест на независимость в корреляционных матрицах 2X2 [371]
      Литература [410]
Глава 22. ПОЛУЧЕНИЕ ЛИМФОИДНЫХ ХИМЕР ПТИЦ (В. Т. Вебер) [411]
  I. Введение [411]
  II. Принцип метода [411]
  III. Детали методики [412]
    A. Генетические линии [412]
    Б. Обработка реципиентов клеток [412]
    B. Приготовление клеток фабрициевой сумки [413]
    Г. Содержание химер [414]
  IV. Анализ химер [414]
    А. Препараты лимфоцитов крови, селезенки и тимуса [414]
    Б. Усовершенствованные условия культивирования в отсутствие сыворотки [415]
    В. Цитогенетические методики [417]
    Г. Использование моноклональных антител [419]
  V. Дополнительные замечания [420]
      Литература [421]
Глава 23. ЗАРОДЫШИ ПТИЦ В ИММУНОЛОГИИ (Дж. Р: Л. Пинк, Ф. Иотеро, Э. Уссэн, В. Т. Вебер) [422]
  I. Введение [422]
  II. Материалы [422]
    А. Источник яиц [422]
    Б. Генетические маркеры и моноклональные антитела [424]
  III. Методы [424]
    A. Получение, инкубация и просвечивание яиц [424]
    Б. Высверливание скорлупы, инъекции и забор крови [426]
    B. Подавление выработки аллотнпов и классов иммуноглобулинов [428]
    Г. Обработка циклофосфамидом [429]
    Д. Обработка тестостероном [429]
    Е. Ранняя хирургическая бурсэктомия [430]
    Ж. Поздняя хирургическая бурсэктомия [430]
    3. Реакции «трансплантат против хозяина» [431]
    И. Парабиоз [433]
    К. Пересадки тимуса и фабрициевой сумки зародышей [434]
    Л. Химеры зародыш—желточный мешок и рекомбинанты бластодерм [438]
    М. Облучение и восстановление костного мозга [439]
      Литература [441]
Глава 24. ОВЦА КАК ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МОДЕЛЬ В ИММУНОЛОГИИ: ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ in vitro И in vivo (Масамюки Миясака, Зденек Трика) [443]
  I. Введение [443]
  II. Содержание экспериментальных овец [445]
  III. Процедуры [445]
    А. Забор крови [445]
    Б. Хирургические процедуры [448]
  IV. Процедуры in vitro [456]
    A. Фракционирование клеток [456]
    Б. Криоконсервация лимфоцитов [461]
    B. Функциональные тесты [462]
    Г. Иммуноцитохимия [464]
      Благодарности [465]
      Литература [465]
Глава 25. МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ Xenopus (Amphibia, Anura) (Л. Дю Паске, М. Флайник, III. Гюье, Э. Хсю) [467]
  I. Введение: иммунная система Xenopus [467]
    A. Лимфоциты и лимфоидные органы Xenopus [467]
    Б. Иммуноглобулины [470]
    B. Главный комплекс гистосовместимости (МНС) Xenopus [470]
    Г. Иммунный ответ [472]
    Д. Своеобразие Xenopus как модели для исследований [472]
  II. Имеющиеся линии и виды животных [473]
  III. Хирургические процедуры на Xenopus [476]
    A. Маркировка животных [476]
    Б. Забор крови у взрослых лягушек [476]
    B. Забор крови и перитонеальной жидкости у головастиков [478]
    Г. Тимэктомия [481]
    Д. Получение химерных зародышей [481]
    Е. Пересадка кожи [481]
  IV. Подготовка лимфоцитов для клеточных культур [482]
    A. Клетки крови [482]
    Б. Суспензии клеток тимуса или селезенки [483]
    B. Получение макрофагов от взрослой лягушки [485]
    Г. Разделение клеточных популяций [485]
  V. Получение иммунологических реагентов [486]
    А. Получение антисывороток [487]
    Б. Моноклинальные антитела [488]
  VI. Изучение иммунной системы [489]
    A. Иммунопреципитация иммуноглобулинов и электрофорез [489]
    Б. Иммунопреципитация мембранных полипептидов [493]
    B. Иммунофлуоресценция [495]
    Г. Гемагглютинация [496]
    Д. Цитотоксический микротест с клетками Xenopus [497]
  VII. Функциональные методы анализа иммунного ответа [498]
    A. Антителообразование и синтез иммуноглобулинов [498]
    Б. Выявление антител после изоэлектрофокусирования [500]
    B. Оценка иммунного ответа на клеточном уровне [502]
    Г. Методы исследования клеточного иммунитета [503]
  VIII. Получение соматических гибридов слиянием лимфоцитов Xenopus с клетками миеломы мышей [506]
  IX. Маркеры клеток; плоидность как маркерный признак [507]
    А. Получение полиплоидных Xenopus [507]
    Б. Способы определения плоидности клеток у химер [508]
  X. Приложение [506]
      Литература [511]
Предметный указатель [514]
Формат: djvu
Размер:7009435 байт
Язык:RUS
Рейтинг: 337 Рейтинг
Открыть: