Хроматография белков и нуклеиновых кислот, Методы исследования белков и нуклеиновых кислот

Автор(ы):Остерман Л. А.
06.10.2007
Год изд.:1985
Описание: В них дан подробный анализ современных технических приемов хроматографии и возможностей новейшей аппаратуры, а также полный справочный материал по обменникам и сорбентам. Анализируются последние достижения гель-фильтрации, распределительной, адсорбционной, ионообменной, аффинной и тонкослойной хроматографии. Рассчитана на биохимиков, медиков, фармакологов и др.
Оглавление:
Хроматография белков и нуклеиновых кислот, Методы исследования белков и нуклеиновых кислот — обложка книги.
  Введение [3]
Глава 1 КЛАССИФИКАЦИЯ И ЭЛЕМЕНТЫ ТЕОРИИ ХРОМАТОГРАФИИ [6]
  Классификация хроматографических методов [6]
    Классификация по принципу фракционирования [6]
    Классификация по способу элюции [11]
    Классификация по расположению неподвижной фазы [12]
  Элементы теории хроматографической элюции [14]
    Хроматографический процесс [14]
    Хроматографическая зона [15]
    Концепция теоретических тарелок [31]
    Разрешение близко мигрирующих зон [34]
    Оптимизация условий фракционирования [36]
    Градиентная элюция [40]
    Хроматография макромолекул [44]
Глава 2 МАТЕРИАЛЫ МАТРИЦ СОРБЕНТОВ И ОБМЕННИКОВ [48]
  Целлюлоза [49]
  Гели на основе декстрана (сефадексы) [51]
  Агароза [53]
  Полиакриламидный гель (ПАЛГ) [54]
    Сефакрилы [55]
    Ультрогели типа АсА [55]
  Полистирольныо смолы [56]
  Полиамидные смолы [57]
  Кизельгур (целит, диатомовая земля) [57]
  Силикагель [58]
  Окись алюминия [62]
  Пористое стекло [63]
  Оксиапатит [63]
Глава 3 ТЕХНИКА КОЛОНОЧНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ [65]
  Хроматография при низком давлении [65]
    Хроматографичегкпе колонки [66]
    Резервуары для элюента. Смесители градиента [72]
    Внесение препарата в колонку [77]
    Перистальтические насосы [71]
    Детекторы [81]
    Коллекторы фракций [86]
    Вспомогательное оборудование [91]
  Хроматография при высоком давлении [91]
    Колонки [93]
    Внесение препарата [95]
    Насосы [96]
    Задание градиента элюции [99]
    Детекторы [100]
    Автоматизация [101]
  Хроматография при умеренном давлении [104]
Глава 4 ГЕЛЬ-ФИЛЬТРАЦИЯ [109]
  Общая характеристика метода [109]
    Основной принцип [109]
    Коэффициенты распределения [110]
    График селективности [112]
    Эффективность фракционирования [112]
  Характеристики продажных матриц [115]
    Матрицы для гель-фильтрации при низком давлении [115]
    Матрицы для гель-фильтрации при высоком давлении [124]
  Методические особенности гель-фильтрации при низком давлении [126]
    Подготовка матрицы [126]
    Набивка колонки [127]
    Проверка качества набивки. Определение (?) [129]
    Внесение препарата [130]
    Поддержание рабочего режима [132]
    Регенерация колонки [133]
  Выбор параметров хроматографического процесса [133]
    Выбор матрицы [133]
    Размеры колонки [135]
    Выбор элюента [135]
    Скорость элюции [136]
    Оптимизация условий эксперимента [136]
  Очистка и фракционирование макромолекул [137]
    Белки и пептиды [137]
    Белково-нуклеиновые комплексы [141]
    Нуклеиновые кислоты [143]
  Определение молекулярной массы белка [145]
    Нативные белки [146]
    Денатурированные белки [152]
  Гель-фильтрация при высоком давлении (ЖХВД) [154]
  Гель-фильтрация в тонком слое [162]
  Литература [166]
Глава 5 РАСПРЕДЕЛИТЕЛЬНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ [168]
  Вводные замечания [168]
  Нормальнофазовая распределительная хроматография [170]
  Распределительная хроматография в обращенных фазах [171]
    Разделение тРНК в системе ХОФ-5 [171]
    Разделение ДНК в системе ХОФ-5 [173]
  Обратнофазовая гидрофобная хроматография при низком давлении [176]
    Немодифицированная сефароза. Элюция снижающимся градиентом концентрации соли [176]
    Гидрофобизированные гели агарозы [180]
  Обратнофазовая гидрофобная хроматография при высоком давлении (ЖХВД) [188]
    Вводные замечания [188]
    Подготовка эксперимента [192]
    Фракционирование аминокислот [194]
    Идентификация ФТГ-производных аминокислот [196]
    Разделение пептидов в градиентах ацетонитрила и спиртов [201]
    Ион-парная хроматография пептидов [203]
    Разделение нуклеозидов и нуклеотидов [207]
    Фракционирование и очистка белков [210]
    Фракционирование нуклеиновых кислот [216]
  Нормальнофазовая ЖХВД [217]
  Литература [218]
Глава 6 АДСОРБЦИОННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ [221]
  Вводные замечания [221]
  Сорбенты [223]
  Приготовление оксиапатита [225]
  Сорбционные свойства оксиапатита [225]
    Сорбция белков [226]
    Сорбция нуклеиновых кислот [229]
  Некоторые особенности хроматографии на оксиапатите [231]
  Фракционирование и очистка белков [233]
  Фракционирование и очистка нуклеиновых кислот [236]
  Разделение двунитевой и однонитевой ДНК [241]
  Очистка гибридов ДНК—РНК [243]
  Очистка НК и нуклеопротеидов от гликогена [244]
  Очистка и концентрирование вирусов [245]
  Очистка белков сорбцией на «Alumina С(?) и геле фосфата кальция в объеме [245]
  Нуклеопротеид-целитная хроматография [245]
  Хроматография на нитроцеллюлозе [246]
  Сорбция на пористом стекле [247]
  Литература [247]
Глава 7 ИОНООБМЕННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ [249]
  Вводные замечания [249]
  Компоненты хроматографической системы [250]
    Ионообменники [250]
    Элюент [255]
    Хроматографируемые вещества [256]
  Хроматографический процесс [257]
    Ионные взаимодействия вещества и сорбента [257]
    Управление силой ионного взаимодействия [262]
    Неионные взаимодействия вещества и сорбента [267]
    Примеси ионов тяжелых металлов [268]
  Характеристики продажных ионообменников [268]
    Ионообменники на основе полистирола (смолы) [268]
    Ионообменники на основе полиакрилата и полиметакрилата [270]
    Ионообменные целлюлозы [270]
    Ионообменные сефадексы [272]
    Ионообменники на основе агарозы [275]
    Ионообменники для ЖХВД [276]
    Ионообменники для хроматографии белков при умеренных давлениях фирмы «Pharmacia» [276]
    Подготовка обменников к набивке в колонку [277]
    Преформирование и промывка [277]
    Перевод в нужную ионную форму [278]
  Опасность поглощения СO2 [280]
    Дополнительные замечания [281]
  Выбор условий статической ионообменной хроматографии [281]
  Нейтрализация щелочи или кислоты без образования соли [281]
    Замена ионов [282]
    Обессоливание растворов [281]
    Удаление некоторых органических примесей [283]
    Концентрирование препаратов [284]
    Разделение компонентов смеси, сильно различающихся по сродству к обменнику [284]
  Выбор условий динамической ионообменной хроматографии [285]
    Выбор ионообменника [286]
    Выбор типа элюции [289]
    Выбор рН буфера для элюции [290]
    Выбор концентрации соли [291]
    Сохранение нативности препарата [292]
    Выбор объема элюента [292]
    Выбор размеров колонки [293]
    Выбор скорости элюции [294]
    Сбор и обработка фракций [295]
    Регенерация ионообменника [295]
  Аминокислотные анализаторы [295]
  Фракционирование пептидов [296]
    Химические методы гидролиза белков [296]
    Ферментативные методы гидролиза белков [297]
    Хроматография пептидов [299]
  Очистка и фракционирование белков [301]
    Концентрирование белка [302]
    Препаративная хроматография на ранних стадиях очистки белка [302]
    Фракционирование белков [309]
    Ионообменная ЖХВД белков [313]
    Система для быстрой хроматографии белков фирмы «Pharmacia» [314]
  Фракционирование нуклеиновых оснований, нуклеозидов и нуклеотидов [316]
    Нуклеиновые основания [316]
    Нуклеозиды [319]
    Нуклеотиды и короткие олигонуклеотиды [319]
    Использование ЖХВД [320]
  Хроматография олигонуклеотидов и нуклеиновых кислот [321]
  Хроматофокусирование [326]
    Колонки для хроматофокусирования [326]
    Фракционирование белков [331]
  Литература [336]
Глава 8 АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ [339]
  Введение [339]
  Компоненты аффинного сорбента [342]
    Матрицы [342]
    Активация матриц [345]
    Спейсеры [357]
    Активированные спейсеры [359]
    Лиганды с индивидуальной специфичностью [361]
    Литанды с групповой специфичностью [362]
    Посадка лигандов на активированные матрицы [375]
    Посадка лигандов на спейсеры с помощью конденсирующих агентов [382]
    Характер закрепления лиганда на матрице [384]
    Иммобилизация нуклеиновых кислот в качестве лигандов [337]
    Сорбенты для ковалентной хроматографии [394]
    Фирменные аффинные сорбенты [398]
  Подготовка и проведение эксперимента [399]
    Выбор сорбента и характера хроматографического процесса [399]
    Выбор концентрации лиганда [400]
    Загрузка сорбента [401]
    Выбор буфера для посадки вещества [404]
    Выбор элюента и метода элюции [406]
    Проведение эксперимента [409]
    Электрофоретическая элюция [411]
    Аффинная ЖХВД [412]
  Избранные примеры [412]
    Очистка ферментов клеточного метаболизма [412]
    Белки, связанные с нуклеиновыми кислотами [420]
    Биоспоцифическая элюция белков [429]
    Аффинная хроматография нуклеиновых кислот [435]
    Аффинная элюция с ионообменника [451]
    Аффинный электрофорез [452]
  Литература [452]
Глава 9 ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ [457]
  Введение [457]
  Носители для ТСХ и электрофореза в тонком слое [460]
    Ацетилцеллюлоза для электрофореза [460]
    Сорбенты для ТСХ [461]
  Техника ТСХ [466]
    Приготовление пластинок [466]
    Нанесение препаратов [467]
    «Проявление» пластинок (хроматографпческая элюция) [471]
    Обнаружение пятен или полос [478]
    Элюция вещества с пластинки [481]
  Примеры использования ТСХ и ТСЭ [482]
    Фракционирование аминокислот и их производных [482]
    Фракционирование пептидов [485]
    Фракционирование нуклеозидов и нуклеотидов [491]
    Фракционирование олигонуклеотидов [496]
    Секвенирование тРНК [502]
  Литература [509]
Приложение 1. СЕКВЕНАТОРЫ БЕЛКОВ [511]
Приложение 2. АМИНОКИСЛОТНЫЕ АНАЛИЗАТОРЫ [515]
Приложение 3. НОВЫЕ СОРБЕНТЫ [528]
УКАЗАТЕЛЬ ПРИМЕРОВ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ [529]

Часть первая ЭЛЕКТРОФОРЕЗ
Введение [3]
  Глава 1 Гели для электрофореза [7]
    Полиакриламидный гель (ПААГ) [7]
      Исходные материалы [7]
      Процесс полимеризации ПААГ [10]
      Выбор концентраций мономеров [13]
    Агароза [16]
    Смешанный гель (агароза+ПААГ) [20]
    Ацетатцеллюлозная пленка, импрегнированная ПААГ [21]
  Глава 2 Техника приготовления гелей и аппаратура [21]
    Вертикально расположенные трубки [21]
    Вертикально расположенные пластины [26]
    Горизонтально расположенные пластины [32]
  Глава 3 Электрофорез белков [37]
    Замечания общего характера [37]
      Миграция белков в геле [37]
      Напряженность электрического поля (Н) [38]
      Выбор буфера рабочего геля [40]
      Выделение тепла при электрофорезе [42]
      Загрузка геля. Ширина белковых зон [44]
      Введение мочевины и (3-меркаптоэтанола. Некоторые артефакты [46]
      Лидирующие красители [47]
    Разделение белков по размерам и заряду [48]
      Выбор рабочего буфера [48]
      Использование мочевины [50]
      Загрузка геля и подготовка препарата [52]
      Некоторые примеры [53]
    Разделение белков по размеру с использованием ДДС-Na [56]
      Существо метода [56]
      Выбор пористости геля [59]
      Присутствие мочевины и нейояных детергентов [60]
      Выбор рабочего буфера геля [61]
      Подготовка белкового препарата [63]
      Проведение электрофореза [63]
      Окрашивание и элюция белков [64]
    Ступенчатый электрофорез (disc-electrophoresis) [66]
    Градиент пористости ПААГ [73]
    Двумерный электрофорез в ПААГ [76]
    Электрофорез с использованием Тритона Х-100 в цетавлона [83]
      Тритон Х-100 [83]
      Цетавлон [85]
    Окрашивание белков в ПААГ [88]
      Кислые красители [90]
      Другие красители и методы окрашивания [94]
      Флюоресцентные красители [97]
      Локализация ферментов после электрофореза [101]
      Локализация белковых полос осаждением ДДС-Na [104]
    Элюция белков из геля [105]
      Определение радиоактивности белков после электрофореза в ПААГ [109]
      Счет радиоактивности в элюатах белка [109]
      Растворение ПААГ [110]
      Импрегнирование сцинтиллятора в гель [111]
      Авторадиография [112]
      Флюорография [113
    Препаративный электрофорез белков [116]
  Глава 4 Электрофорез нуклеиновых кислот [120]
    Замечания общего характера [120]
      Выбор буфера геля и напряженности электрического поля [120]
      Выбор характера геля и его пористости [121]
      Влияние вторичной структуры [123]
      Маркерные молекулы [125]
      Лидирующие красители [126]
    Электрофорез в мягких условиях [126]
      Фракционирование плазмид и фрагментов ДНК [126]
      Фракционирование РНК [128]
    Электрофорез в денатурирующих гелях [128]
      Щелочные гели [129]
      Гели, содержащие мочевину. Секвенирование ДНК и РНК [131]
      Денатурирующие гели с формамидом [135]
      Денатурирующие гели с формальдегидом [138]
      Гели, содержащие гидроокись метилртути [140]
      Денатурация нуклеиновых кислот глиоксалем [142]
    Использование градиентов пористости ПААГ [142]
    Двумерный электрофорез нуклеиновых кислот и их фрагментов [144]
    Некоторые особые случаи электрофореза нуклеиновых кислот [147]
      Электрофорез в геле агарозы тройного комплекса ДНК—РНК-полимераза—РНК [147]
      Выявление мРНК при электрофорезе суммарной РНК в геле агарозы [148]
      Использование жидкого (не сшитого) ПЛАТ [149]
    Окрашивание нуклеиновых кислот после электрофореза [150]
    Элюция нуклеиновых кислот из гелей [153]
      Элюция из ПААГ за счет диффузии [153]
      Элюция из гелей агарозы [154]
      Электрофоретическая элюция [158]
      Перенос нуклеиновых кислот из геля на нитроцеллюлозные фильтры идиазобумагу [162]
    Определение радиоактивности [165]
    Препаративный электрофорез нуклеиновых кислот [166]
    Литература [168]
Часть вторая УЛЬТРАЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ
    Введение [174]
  Глава 1 Основные понятия теории седиментации [175]
  Глава 2 Ультрацентрифуга [177]
    Принцип действия и расположение важнейших узлов [177]
    Проверка готовности основных систем к пуску [179]
    Пуск центрифуги [180]
  Глава 3 Роторы и пробирки [182]
    Угловые роторы [182]
    Пробирки для угловых роторов [184]
    Уход за роторами и пробирками [187]
    Роторы со свободно подвешенными пробирками (бакет-роторы) [189]
    Роторы с вертикальными пробирками [191]
    Максимально допустимая частота вращения ротора [191]
    Зональные роторы [193]
    Особенности эксплуатации и ухода [197]
  Глава 4 Раздельное осаждение частиц (дифференциальное центрифугирование) [199]
  Глава 5 Зонально-скоростное центрифугирование [201]
    Константа седиментации [203]
    Изокинетический градиент плотности [204]
    Выбор среды [206]
    Характеристики растворов сахарозы [210]
    Профиль градиента сахарозы [213]
    Создание градиента плотности сахарозы [214]
    Наслоение препарата на градиент [219]
Формат: djvu
Размер:8644829 байт
Язык:RUS
Рейтинг: 312 Рейтинг
Открыть: